3D Kültür Bodrum Membran Tahlil: Hücre İstilasını İncelemek için 3D Bodrum Membran Protein Matrisinde Kanser Hücrelerini Kültleme
Published: April 30, 2023
Abstract
Kaynak: Cvetković, D., vd. Üç Boyutlu (3D) Model Kullanılarak Meme Kanseri Hücre invazivliğinin Nicelemesi. J. Vis. Exp. (2014).
Bu video, 3D bodrum membran protein matrisinde meme kanseri hücrelerini büyütmek için ayrıntılı bir metodoloji sağlar ve hücre istilasının çevreye değerlendirilmesinde 3D kültürünün potansiyelini örneklendirir.
Protocol
1. Bodrum Membran Matrisinde Meme Kanseri Hücrelerinin Üç Boyutlu Kültürü (Gömme Tekniği) Matrigel bodrum membran matrisinin işlenmesi: 4 °C’de bir gecede buzda çözün. Bodrum membran matrisi düşük sıcaklıkta sıvıdır, ancak oda sıcaklığında katılaşır. Bodrum membran matrisini buz üzerinde tutun (Şekil 1A-B). Bir P-200 Pipetman’ın ucunu spiral desende kullanarak matrisi yaymak suretle 50 μl bodrum membran matrisi ile Konfokal No.1 cam ta…
Representative Results
Şekil 1. Bodrum membran matrisinde (gömme tekniği) MDA-MB-231 meme kanseri hücrelerinin üç boyutlu kültürü. A-B) Deneysel kurulumun şeması (duman kaputunda gerçekleştirilir). C) 50 μl bodrum membran matrisi ile kaplanmış cam tabanlı çanağın kuyusu. D) Matrisin en az 30 dk katılaşmasını sağlamak için bir hücre kültürü inkübatörüne (%5 CO2 ile 37 °C’de) yerleştirilen çanak(lar) Hücreler …
Divulgaciones
The authors have nothing to disclose.
Materials
| 35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes | MatTek Corporation | P35G-1.0-14-C | Precooled before use |
| Bovine serum albumin (BSA) | BioShop | ALB003.100 | Used at 3% for IF |
| 1.5 ml tubes | VWR | CA10011-700 | CA10011-700 |
| 100-mm culture dish BD353003 | VWR | CABD353003 | Sterile, disposable |
| 15 ml Falcon tube | VWR | CA21008-918 | Sterile, disposable |
| 1 ml filtered tips | VWR | 10011-350 | Sterile, disposable |
| 200 μl filtered tips | VWR | 22234-016 | Sterile, disposable |
| 20 μl filtered tips | VWR | 22234-008 | Sterile, disposable |
| Fetal bovine serum (FBS) | Sigma | F1051 | Used at 10% (v/v) |
| RPMI 1640 Medium with Glutamine | Life Technologies | 11875-119 | Used for culturing of MDA-MB-231 cells |
| MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136) | Lonza | CC-3150 | Used for culturing of MCF10A cells |
| Olympus IX-81 microscope | Olympus | Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X) |
Citar este artículo
3D Culture Basement Membrane Assay: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Invasion. J. Vis. Exp. (Pending Publication), e20220, doi: (2023).