Ensaio de membrana de porão da cultura 3D: Culturing Cancer Cells on 3D Basement Membrane Protein Matrix to Study Cell Cell Invasion

Abstract

Fonte: Cvetković, D., et al. Quantificação da invasividade celular do câncer de mama usando um modelo tridimensional (3D). J. Vis. Exp. (2014).

Este vídeo fornece uma metodologia detalhada para o crescimento das células cancerígenas de mama em uma matriz proteica de membrana 3D, exemplificando o potencial da cultura 3D na avaliação da invasão celular no ambiente circundante.

Protocol

1. Cultura tridimensional de células cancerígenas de mama na Matriz de Membrana do Porão (Técnica de Incorporação) Manuseando matrigel matriz de membrana do porão: Descongele no gelo durante a noite a 4 °C. A matriz de membrana do porão é líquida a baixa temperatura, mas se solidifica à temperatura ambiente. Mantenha a matriz de membrana do porão no gelo(Figuras 1A-B). Cubra o prato confocal no.1 de fundo de vidro com 50 μl de matriz de membrana de por?…

Representative Results

Figura 1. Cultura tridimensional de células cancerígenas de mama MDA-MB-231 na matriz de membrana do porão (a técnica de incorporação). A-B) Um esquema da configuração experimental (realizado no capô da fumaça). C) O poço do prato com fundo de vidro revestido com 50 μl de matriz de membrana de porão. D) Prato(es) colocado em uma incubadora de cultura celular (a 37 °C com 5% de CO2) para permitir que a matriz…

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes	MatTek Corporation	P35G-1.0-14-C	Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA)	BioShop	ALB003.100	Used at 3% for IF
1.5 ml tubes	VWR	CA10011-700	CA10011-700
100-mm culture dish BD353003	VWR	CABD353003	Sterile, disposable
15 ml Falcon tube	VWR	CA21008-918	Sterile, disposable
1 ml filtered tips	VWR	10011-350	Sterile, disposable
200 μl filtered tips	VWR	22234-016	Sterile, disposable
20 μl filtered tips	VWR	22234-008	Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS)	Sigma	F1051	Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine	Life Technologies	11875-119	Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)	Lonza	CC-3150	Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope	Olympus		Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)