3D Культура Подвал Мембрана Анализ: Культивирование раковых клеток на 3D Подвал Мембрана Белковая матрица для изучения вторжения клеток

Abstract

Источник: Цветкович, Д., и др. Количественная оценка инвазивности раковых клеток молочной железы с использованием трехмерной (3D) модели. J. Vis. Exp. (2014).

Это видео предоставляет подробную методологию для выращивания раковых клеток молочной железы в 3D мембранной мембранной белковой матрице, окстифицируя потенциал 3D-культуры в оценке вторжения клеток в окружающую среду.

Protocol

1. Трехмерная культура раковых клеток молочной железы в матрице мембран подвала (Техника встраивания) Обработка матрицы мембраны подвала Matrigel: Оттепель на льду на ночь при 4 градусов по Цельсию. Мембранная матрица подвала является жидкой при низкой температуре, но затвер?…

Representative Results

Рисунок 1. Трехмерная культура клеток рака молочной железы MDA-MB-231 в мембранной матрице подвала (техника встраивания). A-B) Схема экспериментальной установки (выполненной в дымовом капоте). C) Колодец стеклянного дна, покрытый 50 мкл мемб…

Materials

35-mm glass-bottomed Confocal No.1 culture dishes	MatTek Corporation	P35G-1.0-14-C	Precooled before use
Bovine serum albumin (BSA)	BioShop	ALB003.100	Used at 3% for IF
1.5 ml tubes	VWR	CA10011-700	CA10011-700
100-mm culture dish BD353003	VWR	CABD353003	Sterile, disposable
15 ml Falcon tube	VWR	CA21008-918	Sterile, disposable
1 ml filtered tips	VWR	10011-350	Sterile, disposable
200 μl filtered tips	VWR	22234-016	Sterile, disposable
20 μl filtered tips	VWR	22234-008	Sterile, disposable
Fetal bovine serum (FBS)	Sigma	F1051	Used at 10% (v/v)
RPMI 1640 Medium with Glutamine	Life Technologies	11875-119	Used for culturing of MDA-MB-231 cells
MEGM (bullet kit): MEBM (CC3151)+Single quots (CC4136)	Lonza	CC-3150	Used for culturing of MCF10A cells
Olympus IX-81 microscope	Olympus		Used for 3D culture imaging (DIC images at 10X and 40X)