في المختبر استخدام تينوسيتيس التنكسية ضروري عند التحقيق في فعالية العلاج الرواية في تيندينوباثي. ومع ذلك، استخدام معظم البحوث والدراسات فقط نموذج الحيوان أو تينوسيتي صحية. ونحن نقترح البروتوكول التالي لعزل تينوسيتيس التنكسية الإنسان أثناء الجراحة.
تيندينوباثي، حالة مؤلمة أن يتطور استجابة لانحطاط وتر، أخذ في الارتفاع في العالم المتقدم النمو بسبب زيادة النشاط البدني وعمر أطول. على الرغم من انتشاره المتزايد، المرضية الأساسية لا تزال غير واضحة، وعلاج الأعراض عموما. في الآونة الأخيرة، تم التحقيق في العديد من الخيارات العلاجية، بما في ذلك عوامل النمو والخلايا الجذعية والعلاج الجيني، أملا في تعزيز فاعلية الشفاء لوتر التنكسية. ومع ذلك، أجريت معظم هذه الدراسات البحثية فقط على نماذج حيوانية أو تينوسيتيس بشرية صحية. على الرغم من بعض الدراسات باستخدام تينوسيتيس المرضية، على حد علمنا لا يوجد حاليا البروتوكول لا تصف كيفية الحصول على تينوسيتيس التنكسية البشرية. الهدف من هذه الدراسة وصف بروتوكول قياسي لاكتساب تينوسيتيس التنكسية البشرية. في البداية، كان حصاد الأنسجة وتر من مريض مع اللقيمه أثناء الجراحة. ثم أخذت عينات خزعة من باسطة الباسطة القصيرة وتر المقابلة للتغييرات الهيكلية التي لوحظت في وقت الجراحة. ظهر كل الأوتار المقطوع لتكون مملة، والرمادي، وقابلة للتفتيت، ومتوذمه، مما جعلها متميزة بصريا من الأصحاء. تينوسيتيس مثقف وتستخدم لإجراء التجارب. وفي الوقت نفسه، حللت نصف الأنسجة المقطوع الأشيع، وتبين أنهما يشتركان في نفس الميزات الرئيسية من تيندينوباثي (خلل التنسج أنجيوفيبروبلاستيك أو تضخم). وأكد تحليل ثانوي من إيمونوسيتوتشيميستري الخلايا المستزرعة تينوسيتيس مع الأغلبية من وجود البقع الإيجابية للبروتينات الموهوك وتينومودولين الخلايا. ثم حددت صفات طبيعة الأمراض التنكسية تينوسيتيس بمقارنة الخلايا مع مراقبة صحية باستخدام مقايسة الانتشار أو قرت-بكر. عرض تينوسيتي التنكسية أعلى معدل انتشار وأنماط التعبير الجيني مماثلة تيندينوباثي مطابقة للتقارير السابقة. وعموما، هذا البروتوكول الجديد قد توفر أداة مفيدة للدراسات المستقبلية من تيندينوباثي.
تيندينوباثي هو شرط العضلات والعظام التنكسية مزمنة التي تتطور في أجزاء مختلفة من الجسم. في الآونة الأخيرة، ازداد عدد الحالات من تيندينوباثي إلى حد كبير في العالم المتقدم النمو بسبب تزايد المشاركة في الرياضة الترفيهية وزيادة متوسط العمر المتوقع1،2. يعتبر القضية تيندينوباثي المتعددة العوامل، وتتضمن هذه الأسباب الاسكيمية، وإصابات الجذور الحرة الأكسجين، واختلال توازن بين innervations مضيق للأوعية ووعائي والدموع الصغيرة الداخلية والتغيرات العصبية-التنظيم3 ،،من45،6،،من78. معظم العلاجات تيندينوباثي فقط تخفيف أعراضه. وعلاوة على ذلك، العلاج دون تجديد الأنسجة تتطلب وقتاً طويلاً لإعادة التأهيل وتحقيق استجابة محدودة من الأوتار الجرحى، مما يفرض تحديا السريري للأطباء9.
وقد عجز خيارات العلاج الحالي جنبا إلى جنب مع عدم القدرة على وتر الأمراض التنكسية للاعطاب الباحثين يؤدي الاهتمام باستكشاف استراتيجيات العلاج البديل. في الآونة الأخيرة، أفادت الدراسات الجديدة العديد من النتائج المبشرة بالخير لتعزيز فعالية الشفاء الأوتار تيندينوباثي باستخدام عوامل النمو، الخلايا الجذعية استناداً إلى العلاج، والجينات العلاج10،،من1112.
ومن خلال استعراض الأدبيات، وجدنا أن الدراسات المعنية قد تقسم إلى فئتين استناداً على تحليل المواد: نماذج الحيوانات مثل الفئران، أو ماوس، أو أرنب؛ والنماذج البشرية. فيما يتعلق بالنموذج الحيواني، وحاليا هناك اثنين من التقنيات شعبية لتوليد تيندينوباثي: الكيميائية التعريفي للإصابة أو الميكانيكية التحميل الزائد النموذج. ومع ذلك، كانت محدودة كل نموذج الحيوان في استنساخ ال13،علم الأمراض المعقدة تيندينوباثي البشرية14.
معظم الأوراق باستخدام العينات البشرية حللت الأشيع أو أداؤها في المختبر التجربة استناداً إلى تينوسيتي بشرية صحية بدلاً من الأمراض التنكسية تينوسيتي15،16،،من1718 , 19 , 20 , 21-إلا بضع ورقات أفادت أنها تستخدم تينوسيتي التنكسية بشرية، ولكن أنها لم تصف بالتفصيل البروتوكول المستخدم للحصول على تينوسيتي التنكسية من البشرية22،23. وفي هذا السياق، تجدر الإشارة إلى أن نتائج ناجحة من الطراز الحيوان أو صحية الأنسجة/تينوسيتي قد لا بالضرورة التنبؤ بفعالية الإنسان أو الجرعات الفعالة نظراً لانحطاط وتر عملية معقدة، والآلية المرضية لا تزال غير مفهومة تماما.
جماعياً، من الضروري أن تصف البروتوكول القياسي للحصول على تينوسيتي التنكسية من الأنسجة البشرية دون التسبب في آثار ضارة إلى الجهة المانحة. توضح هذه المقالة بروتوكول حول كيفية الحصول على تينوسيتي التنكسية البشرية. للتحقق من البروتوكول، تم تحليل الأنسجة المقطوع الأشيع. بعد ذلك، تم تأكيد الخلية مثقف تينوسيتي التنكسية باستخدام إيمونوسيتوتشيميستري (المحكمة الجنائية الدولية) وكمية الوقت الحقيقي-تفاعل البوليميراز المتسلسل (قرة-PCR) مقايسة بقاء.
وقد أفاد عدد من الدراسات السابقة كيفية إنشاء نماذج حيوانية تيندينوباثيك المزمن باستخدام إجراءات مختلفة مثل كولاجيناز أو حقن كارتوجينين وتشغيل المطحنة وأكثر26،27. على الرغم من أن العديد من الدراسات التي تبين الآثار العلاجية الواعدة استناداً إلى هذه النماذج…
The authors have nothing to disclose.
كان يؤيد هذا البحث بمنحه من كوريا الصحة التكنولوجيا والتطوير د المشروع من خلال كوريا الصحة الصناعة تطوير معهد (خيدي)، الذي تموله وزارة الصحة والرعاية الاجتماعية، جمهورية كوريا (منح رقم: HI16C1559).
Scalpel | Kisanbio | KS-Q0306-15 | No. 15 |
Mini-blade | Beaver | 374769 | |
Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) | Gibco | 11995065 | |
Collagenase Ⅱ | Sigma-Aldrich | C6885 | |
PBS | Gibco | 14190250 | |
fetal bovine serum (FBS) | Gibco | 16000044 | |
50 mM ascorbic acid-2-phosphate | Sigma-Aldrich | A5960 | |
Antibiotic-Antimycotic solution | Gibco | 15240062 | |
4% formaldehyde | Bio-solution | BP031 | |
Triton X-100 | Sigma-Aldrich | X100-100ml | |
BSA | Rdtech | C0082 | |
TWEEN 20 | Sigma-Aldrich | P9416-100ml | |
MKX (C-5) | Santa cruz biotechnology | sc-515878 | |
Tenomodulin (N-14) | Santa cruz biotechnology | sc-49325 | |
Fluorescence Mounting Medium | DAKO | S3023 | |
DAPI (4',6-Diamidino-2-Phenylindole, Dihydrochloride) | Thermo Fisher Scientific | D1306 | |
WST-1 | Dojindo Molecular Technologies | CK04 | |
BrdU Cell Proliferation Assay Kit | Cell Signaling Technology | #6813 | |
TRIzol Reagent | Invitrogen | 15596018 | |
iScript cDNA Synthesis Kit | Bio-Rad | 170-8891 | |
TaqMan Gene Expression Master Mix | Applied Biosystems | 4369016 | |
GAPDH | Thermo Fisher Scientific | Hs02786624_g1 | |
COL3A1 | Thermo Fisher Scientific | Hs00943809_m1 | |
ACTA2 | Thermo Fisher Scientific | Hs00426835_g1 | |
TAC1 | Thermo Fisher Scientific | Hs00243225_m1 | |
TACR1 | Thermo Fisher Scientific | Hs00185530_m1 | |
PTGS2 | Thermo Fisher Scientific | Hs00153133_m1 | |
ACTB | Thermo Fisher Scientific | Hs99999903_m1 | |
Cell Strainers (100 µm) | Corning | 352360 | |
100mm culture dish | Thermo Fisher Scientific | 8188207 | |
8-well Chamber Slide | Thermo Fisher Scientific | 154534 | |
96 Well Clear Flat Bottom Polystyrene TC-Treated Microplates | Corning | 3596 | |
Nikon Eclipse 50i Microscope | Nikon | ||
VERSA max microplate reader | Molecular Devices | ||
CFX96 Real-Time PCR Detection System | Bio-Rad | ||
Formalin solution, neutral buffered, 10% | Sigma-Aldrich | HT501128 | |
Paraffins | Leica Biosystems | 3801340 | |
Ethanol | JUNSEI CHEMICAL | 90303-2185 | |
Hematoxylin | DAKO | CS70030-2 | |
Eosin | DAKO | CS70130-2 | |
Alcian blue | DAKO | AR16011-2 | |
Citric acid | Sigma-Aldrich | 251275 | |
Xylene | JUNSEI CHEMICAL | 25165-0430 | |
Endogenous peroxidases | DAKO | S200380-2 | |
Canada balsam | JUNSEI CHEMICAL | 23255-1210 | |
Microtome Blade | FEATHER | A35 | |
Slide glass | SUPERIOR | 1000612 | |
Cover glass | Marienfeld-Superior | 101050 | |
VEGF | Santa cruz biotechnology | sc-7269 | |
SPSS Software | IBM | Ver. 18.0 | |
Multi-purpose Centrifuge | LABOGENE | 1248R |