هذا الفيديو يوضح ثقافة جديدة ، وهي الطريقة التي يتم تربيتها افراخ الدجاج خارج البويضة لمدة تصل إلى 24 ساعة. هذه الطريقة تمكن واحد لدراسة التطور المبكر (مسحة البدائية إلى 14 سوم) ، وهي الفترة المقابلة ل9 – E7 في الماوس. تطبيقات هذه التقنية تشمل electroporation ، التهجين في الموضع والمناعية.
Abstract
الجنين الفرخ هو أداة قيمة في دراسة التطور الجنيني المبكر. شفافيته ، وسهولة الوصول وسهولة التلاعب ، وجعلها أداة مثالية لدراسة تشكيل والزخرفة من والدماغ الجسيدة ، الأنبوب العصبي والقلب primordia. تطبيقات الثقافة الجنين الفرخ تشمل electroporation بنيات الحمض النووي الريبي أو من أجل تحليل وظائف الجينات ، والطعوم من الخرز عامل النمو المغلفة مثل FGFs وأفضل الممارسات الإدارية ، وكذلك جبل بأكمله في الموقع التهجين والمناعية. هذا الفيديو يوضح الخطوات المختلفة في الثقافة الجنين فرخ ؛ أولا ، explanted الجنين في المياه المالحة. ثم ، يتركز على الجنين حلقة الزجاج. يتم رفع الأغشية التي تحيط بالجنين على طول الجدران من الحلبة. ثم يتم وضع الخاتم في صحن الثقافة التي تحتوي على مجموعة من albumine. غير مختومة طبق الثقافة وضعت في غرفة رطبة ، حيث يتم تربيتها في جنين لمدة تصل إلى 24 ساعة. أخيرا ، تتم إزالة الجنين من الحلقة ، والثابتة وتجهيزها لتطبيقات أخرى. وتقدم أيضا دليلا المشاكل.
Protocol
الجزء 1 : بينش إعداد ويتم إعداد الغرفة الرطبة عن طريق وضع Kimwipe / 2 O DDH في غرفة البلاستيك. يتم وضع أنبوب فالكون لجمع الزلال ، والأطباق للثقافة والخواتم وwatchglass والتخلص من النفايات على مقاعد …
Discussion
ويمكن استخدام أسلوب 2 للثقافة الجديدة تشكيلة واسعة من التطبيقات ، بدءا من الطعوم من عامل النمو التي تحتوي على حبات 3 ، لتحميل كامل التهجين في الموقع وتحميل كامل المناعية 4. الثقافة خلال فترة 24 ساعة تمكن الرصد المستمر من التطور الجنيني في تطبيقات مثل الفاصل ?…
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل مؤسسة مارغريت Alkek M. إلى RHF.
Materials
Material Name
Tipo
Company
Catalogue Number
Comment
Eggs
Animal
Charles River Laboratories
Premium Fertile
Stereomicroscope
Microscope
Leica Microsystems
MZ9.5 or similar
Marsh Automatic Incubator
Tool
Lyon
RX
Hybridization Incubator
Tool
Robbins Scientific
M1000
Pyrex dish (2)
Tool
Watchmaker’s glass 50mm
Tool
VWR
66112-060
Glass rings
Tool
Physical Plant facility
cut 4 mm thick sections of glass tubing (27 mm outer diam, 25 mm inner diam). Do not fine polish.
Curved Forceps (1)
Surgery
Electron Microscopy Sciences
72991-4C
Forceps (2)
Surgery
Fine Science Tools
11002-13
blunt ended using sharpening Stone and 100ul mineral oil
Sharpening Stone Dan’s Black Arkansas
Surgery
Electron Microscopy Sciences
62082-00
Fine scissors
Surgery
Fine Science Tools
14161-10
Plastic dishes
Tool
Falcon
353001
Rubber Bulb
Tool
Electron Microscopy Sciences
70980
Pasteur Capillary Pipette
Tool
Electron Microscopy Sciences
70950-12
round edge under flame
Microcapillary tube
Surgery
Sigma
P1049-1PAK
Pull using vertical micropipette puller; blunt end with fine forceps
Microdissecting knife
Surgery
Fine Science Tools
10056-12
Use to puncture cavities prior to in situ hybridization
Minuten pins 0.2mm diam
Surgery
Fine Science Tools
26002-20
Sylgard 184 Silicon Elastomer Curing Agent and Base
Reagent
Dow Corning
0001986475
Mix 1 part Curing Agent, 9 parts Base; set O/N at 37C