A reversível, método não-invasivo para medições de Resistência das Vias Aéreas e Amostragem Líquido da Lavagem Broncoalveolar em Ratos

Summary

Medidas repetidas de fisiologia respiratória dos roedores e amostragem de células inflamatórias nas vias aéreas são desejáveis, mas geralmente não é viável. Aqui nós descrevemos um método repetitivo para entubar camundongos por via oral, que permite medições repetidas de hiper-reatividade das vias aéreas e amostragem de células inflamatória das vias aéreas.

Abstract

Hiper-reatividade das vias aéreas (AHR) medições e lavado broncoalveolar de amostragem de fluido (BAL) são essenciais para modelos de asma experimental, mas os procedimentos repetidos para obter tais medições no mesmo animal geralmente não são viáveis. Aqui, demonstramos protocolos para obtenção de camundongos medidas repetidas da AHR e broncoalveolar amostras lavado. Camundongos foram desafiados por via intranasal sete vezes mais de 14 dias com um alérgeno forte ou sham tratado. Antes do desafio inicial, e dentro de 24 horas após cada desafio intranasal, os mesmos animais foram anestesiados, intubados por via oral e ventilados mecanicamente. AHR, avaliada pela comparação das curvas dose-resposta de resistência do sistema respiratório (RRS) induzida pelo aumento doses intravenosas de cloreto de acetilcolina (Ach) entre farsa e alérgenos desafiou os animais, foram determinadas. Posteriormente, e através da intubação mesmo, o pulmão esquerdo foi lavaged para que a enumeração diferencial de células das vias aéreas pode ser realizada. Estes estudos revelam que as medidas repetidas da AHR e coleta de LBA são possíveis nos mesmos animais e que hiperreactividade das vias aéreas máxima e eosinofilia são alcançados dentro de 7-10 dias do início da provocação alergênica. Esta nova técnica reduz significativamente o número de ratos necessária para a experimentação longitudinal e é aplicável a diversas espécies de roedores, modelos de doenças das vias aéreas e instrumentos de fisiologia.

Protocol

Alérgeno desafio: Camundongos C57BL / 6, 4-8 semanas de idade, são anestesiados em uma câmara hermética plexiglass purgado com isoflurano 3,2% em mistura de vapor de oxigênio por 10 minutos para atingir a anestesia geral profunda. Desafios alérgeno intranasal (OVA 45μL (22,5 g) e 7μL A. oryzae (7 mg), em PBS) são administrados, todas as terças, quintas e domingos, para um total de sete aplicações consecutivas. Anestesia: Antes de ca…

Discussion

O estudo da asma, e várias outras doenças obstrutivas das vias aéreas, constitui um campo ativo e expansão da pesquisa biomédica. Um componente importante da pesquisa relacionados à asma experimental é a capacidade de medir mudanças no tamanho das vias aéreas, sob condições variáveis. Estreitamento das vias aéreas excessivo em resposta ao desafio provocador, uma característica canônica de asma e doenças pulmonares relacionadas e uma propriedade da hiperreactividade das vias aéreas denominado, é um comp…

Materials

Airway physiology measurement software (Rescomp) was custom prepared (Millenium Premier Group; 415-519-4371).
Data was analyzed using a PC workstation running Windows XP equipped with a Pentium III CPU (Intel, Inc. Santa Clara, CA) and a 17-pin analog to digital signal converter (National Instruments, #PC-LPM16).
A small animal airway physiology workstation was custom assembled (Millenium Premier Group) using commercially available pressure transducers (part #TRD5700 and TRD4510), preamp modules (part #MAX2270), chassis (part # MAX1320; all from Buxco, Inc. Wilmington, NC) and a customized small animal plethysmograph.
0.5mm external diameter fiber-optic thread, connected to light source (Cole Palmer Illuminator, 41722 series)
Ventilator (Harvard Apparatus Mouse Ventilator, #687)
10 mm, 27ga needle (BD Biosciences, cat. no. 309602)
Heat lamp
1 ml syringe (BD Biosciences, cat. no. 305109)
4 clamps (Pony 3200 spring clamp)
0.5 mm external wire for intubation guide
Hemacytometer
Superfrost/plus microscope slides (Fisher cat. no. 12-550-15)
Shandon Filter Cards (Thermo cat. no. 5991022)
Differential cell slide stain (Fisher cat. no. 122911)
Light microscope (Leica)
Cytospin 3 (Shandon)
20 ga, 1.25 inch ProtectIV intravenous catheters (Smith Medical)
0.5 mm polymer optical fiber (Edmund Optics # NT02-532).

<!– OLD Materials List 4/12/10 Changed

Airway physiology measurement software (Rescomp) was custom prepared (Millenium Premier Group; 415-519-4371) and data were analyzed using a PC workstation running Windows XP equipped with a Pentium III CPU (Intel, Inc. Santa Clara, CA) and a 17-pin analog to digital signal converter (National Instruments, #PC-LPM16). Small animal airway physiology workstation was custom assembled (Millenium Premier Group) using commercially available pressure transducers (part #TRD5700 and TRD4510), preamp modules (part #MAX2270) and chassis (part # MAX1320; all from Buxco, Inc. Wilmington, NC) and a customized small animal plethysmograph. 0.5mm external diameter fiber-optic thread, connected to light source (Cole Palmer Illuminator, 41722 series); Ventilator (Harvard Apparatus Mouse Ventilator, #687); 10 mm, 27ga needle (BD Biosciences, cat. no. 309602); Heat lamp; 1 ml syringe (BD Biosciences, cat. no. 305109); 4 clamps (Pony 3200 spring clamp); 0.5 mm external wire for intubation guide); Hemacytometer; Superfrost/plus microscope slides (Fisher cat. no. 12-550-15); Shandon Filter Cards (Thermo cat. no. 5991022); Differential cell slide stain (Fisher cat. no. 122911); Light microscope (Leica); Cytospin 3 (Shandon); 20 ga, 1.25 inch ProtectIV intravenous catheters (Smith Medical); 0.5 mm polymer optical fiber (Edmund Optics # NT02-532).

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