उच्च संकल्प Respirometry permeabilized और बरकरार कोशिकाओं में mitochondrial समारोह का आकलन करने के लिए
Summary
उच्च संकल्प respirometry mitochondrial ऑक्सीजन की खपत निर्धारित करने के लिए प्रयोग किया जाता है। इस mitochondrial श्वसन श्रृंखला परिसरों '(मैं-चतुर्थ) श्वसन दर, अधिक से अधिक mitochondrial इलेक्ट्रॉन परिवहन प्रणाली की क्षमता, और mitochondrial बाहरी झिल्ली अखंडता को निर्धारित करने के लिए एक सरल तकनीक है।
Abstract
A high-resolution oxygraph is a device for measuring cellular oxygen consumption in a closed-chamber system with very high resolution and sensitivity in biological samples (intact and permeabilized cells, tissues or isolated mitochondria). The high-resolution oxygraph device is equipped with two chambers and uses polarographic oxygen sensors to measure oxygen concentration and calculate oxygen consumption within each chamber. Oxygen consumption rates are calculated using software and expressed as picomoles per second per number of cells. Each high-resolution oxygraph chamber contains a stopper with injection ports, which makes it ideal for substrate-uncoupler-inhibitor titrations or detergent titration protocols for determining effective and optimum concentrations for plasma membrane permeabilization. The technique can be applied to measure respiration in a wide range of cell types and also provides information on mitochondrial quality and integrity, and maximal mitochondrial respiratory electron transport system capacity.
Introduction
माइटोकॉन्ड्रिया, सेलुलर ऊर्जा चयापचय में महत्वपूर्ण भूमिका को पूरा विशेष रूप से ऑक्सीजन का उपयोग adenosine triphosphate (एटीपी) के उत्पादन के लिए है। वे कोशिका मृत्यु और कई मानव रोगों में फंसा रहे हैं। Mitochondrial आक्सीकारक फास्फारिलीकरण (OXPHOS) ऑक्सीजन की खपत और एटीपी संश्लेषण के साथ इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला के साथ इलेक्ट्रॉन परिवहन को जोड़ती है। Mitochondrial tricarboxylic एसिड (टीसीए) चक्र प्रोटीन, कार्बोहाइड्रेट और वसा का रूपांतरण निकोटिनामाइड एडेनाइन डाईन्यूक्लियोटाइड (NADH) और पीला रंग adenine डाईन्यूक्लियोटाइड के रूप में ऊर्जा समृद्ध यौगिकों (FADH 2) में में शामिल है। NADH और FADH 2 की इलेक्ट्रॉनों तो सांस इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला प्रोटीन परिसरों के लिए स्थानांतरित कर रहे हैं (मैं चतुर्थ) भीतरी mitochondrial झिल्ली में स्थित है। इसके अलावा, दो अन्य redox रास्ते परिवहन श्रृंखला इलेक्ट्रॉन के इलेक्ट्रॉनों हस्तांतरण कर सकते हैं: i) mitochondrial इलेक्ट्रॉन स्थानांतरित flavoprotein (ईटीएफ) जो भीतरी Mito के मैट्रिक्स चेहरे पर स्थित हैफैटी एसिड β ऑक्सीकरण से chondrial झिल्ली, और आपूर्ति इलेक्ट्रॉनों; और ii) mitochondrial glycerophosphate डिहाइड्रोजनेज जो dihydroxyacetone फॉस्फेट के लिए glycerophosphate ऑक्सीकरण होता है और mitochondrial इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला के लिए इलेक्ट्रॉनों खिलाती है। परिसर चतुर्थ (परम इलेक्ट्रॉन स्वीकर्ता), एक ऑक्सीजन अणु इलेक्ट्रॉनों स्थानान्तरण पानी के दो अणुओं में ऑक्सीजन परिवर्तित। चतुर्थ करने के लिए मैं सांस इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला परिसर से इलेक्ट्रॉनों का चल रहा है intermembrane अंतरिक्ष जो mitochondrial भीतरी झिल्ली भर में एक विद्युत ढाल स्थापित करने के लिए mitochondrial मैट्रिक्स से प्रोटॉन प्रवाह के साथ युग्मित है। बाद में, mitochondrial परिसर वी (एटीपी synthase) हाइड्रोजन आयन mitochondrial मैट्रिक्स में वापस शटल और एटीपी अणुओं synthesizes। OXPHOS समारोह vivo में इन विट्रो में विभिन्न तकनीकों और विभिन्न mitochondrial श्वसन राज्यों का उपयोग कर प्राप्त किया जा सकता का आकलन किया जा सकता है। पृथक माइटोकॉन्ड्रिया निम्नलिखित respirato मेंRY राज्यों मापा जा सकता है: i) बेसल mitochondrial श्वसन (राज्य 1), द्वितीय) mitochondrial श्वसन श्रृंखला परिसरों के विशिष्ट substrates के अलावा के बाद ऑक्सीजन की खपत (राज्य 2), iii) अधिक से अधिक mitochondrial ऑक्सीजन की खपत की सांद्रता saturating के अलावा के बाद adenosine diphosphate (ADP) (राज्य 3) और, चतुर्थ) ADP खपत (एटीपी करने के लिए परिवर्तित करने के बाद आराम कर रही श्वसन) (राज्य) 4। बरकरार कोशिकाओं में निम्नलिखित श्वसन राज्यों मापा जा सकता है: i) अंतर्जात substrates और ADP की उपस्थिति में बेसल सेलुलर ऑक्सीजन की खपत, द्वितीय) oligomycin की उपस्थिति में बेसल सेलुलर ऑक्सीजन की खपत (oligomycin-असंवेदनशील श्वसन) और oligomycin के प्रति संवेदनशील श्वसन (एटीपी कारोबार), iii) FCCP uncoupled श्वसन, और antimycin ए और rotenone के अलावा के बाद iv) गैर-mitochondrial श्वसन। permeabilized कोशिकाओं में, इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला परिसरों और ADP के विशिष्ट substrates जोड़ा जा सकता है और अधिक से अधिक जटिल निर्भर सांस की दरों रोंuch के रूप में जटिल मैं-, द्वितीय और चतुर्थ निर्भर सांस की दरों में मापा जा सकता है।
सेलुलर श्वसन की माप mitochondrial श्वसन परिसरों मैं-चतुर्थ, mitochondrial अखंडता और ऊर्जा चयापचय 1, 2, 3 के लिए विशिष्ट क्षमता में महत्वपूर्ण अंतर्दृष्टि प्रदान करते हैं। उपकरणों जो उच्च सटीकता, संकल्प और संवेदनशीलता के साथ mitochondrial ऑक्सीजन की खपत की माप सक्षम की एक उच्च संकल्प Oxygraph 4 है। उच्च संकल्प Oxygraph डिवाइस इंजेक्शन बंदरगाहों के साथ दो कक्षों में शामिल है और प्रत्येक कक्ष एक polarographic ऑक्सीजन सेंसर से लैस है। सेलुलर या पृथक mitochondrial निलंबन respirometer में लगातार हड़कंप मच गया। mitochondrial जटिल गतिविधि के लिए mitochondrial समारोह, substrates और अवरोधकों का आकलन करने के लिए मानक प्रोटोकॉल का पालन जोड़ा जा सकता है। Substrates और अवरोधकों इंजेक्शन int द्वारा titrated किया जा सकताओ Oxygraph के कक्षों, और ऑक्सीजन की खपत की दर सॉफ्टवेयर का उपयोग कर की गणना की और प्रति कोशिकाओं की संख्या प्रति सेकंड picomoles के रूप में व्यक्त कर रहे हैं। उच्च संकल्प respirometry वृद्धि की संवेदनशीलता और ऐसे बरकरार या permeabilized कोशिकाओं के रूप में जैविक नमूने की कम संख्या के साथ काम करने की क्षमता सहित पारंपरिक और पारंपरिक polarographic ऑक्सीजन इलेक्ट्रोड उपकरणों पर कई लाभ प्रदान करता है। इसके अलावा, प्रत्येक डिवाइस दो कक्षों में शामिल है, और सांस की दरों में ऑक्सीजन सांद्रता की तुलना के लिए एक साथ दर्ज किया जा सकता है। उच्च संकल्प Oxygraph भी पारंपरिक polarographic ऑक्सीजन इलेक्ट्रोड उपकरणों की तुलना में युक्ति कक्षों से ऑक्सीजन की कम रिसाव का लाभ दिया है। हाल ही में एक और डिवाइस सेलुलर ऑक्सीजन की खपत को मापने के लिए विकसित 96 अच्छी तरह से बाह्य प्रवाह विश्लेषक 5 है। बाह्य प्रवाह विश्लेषक polarographic सेंसर के बजाय रोशनी से सुसज्जित है। कोशिकी के फायदेप्रवाह विश्लेषक उच्च संकल्प Oxygraph मैं) कर रहे हैं यह एक बड़े पैमाने पर स्वचालित उपकरण है ii) यह 24 और उच्च throughput स्क्रीनिंग के लिए 96 अच्छी तरह प्लेटें में ऑक्सीजन की खपत को मापने के लिए संभव है की तुलना में है, इसलिए, जैविक नमूने की कम मात्रा की आवश्यकता होती है और iii) सेलुलर glycolytic प्रवाह के अतिरिक्त माप संभव है। उच्च संकल्प Oxygraph की तुलना में बाह्य प्रवाह विश्लेषक का नुकसान रहा हैं) डिवाइस के लिए और इस तरह फ्लोरोसेंट प्लेट, जो गैर पुन: प्रयोज्य हैं के रूप में उपभोक्ता वस्तुओं की उच्च लागत, और द्वितीय) परख प्रति केवल चार यौगिकों / अच्छी तरह से इंजेक्शन हैं अत: प्रणाली सब्सट्रेट-uncoupler-अवरोध अनुमापन प्रोटोकॉल के लिए संभव नहीं है।
वर्तमान अध्ययन में, हम mitochondrial श्वसन निर्धारित करने के लिए उच्च संकल्प respirometry का उपयोग करें। सेलुलर ऑक्सीजन की खपत प्रयोगों के लिए, कोशिकाओं Complexe में इलेक्ट्रॉनों के भोजन के लिए बहिर्जात ADP और oxidizable mitochondrial substrates के प्रवेश को अनुमति देने के लिए कर रहे हैं permeabilizedश्वसन प्रणाली के एस। यह दृष्टिकोण अलग-अलग mitochondrial परिसरों श्वसन क्षमता के विच्छेदन, जो बरकरार कोशिकाओं की तुलना में एक विशिष्ट लाभ है (कई substrates सेल impermeant) कर रहे हैं अनुमति देता है। हालांकि, कोशिका झिल्ली permeabilization cytosol और बाह्य अंतरिक्ष और मध्यम (साइटोसोलिक विलेय के बाहर धोने) और intracellular अंतरिक्ष की संरचना के बीच बाधा बाह्य माध्यम के साथ equilibrated है बाधित करेगा। बरकरार कोशिकाओं पर permeabilized कोशिकाओं के नुकसान में से एक यह है कि mitochondrial बाहरी झिल्ली यदि डिटर्जेंट की अत्यधिक मात्रा में सेल permeabilization के दौरान कार्यरत हैं क्षतिग्रस्त किया जा सकता है। बरकरार कोशिकाओं में, बेसल, बरकरार कोशिकाओं के युग्मित और uncoupled श्वसन मापा जा सकता है। इस विधि बहिर्जात substrates और ADP के अलावा बिना बरकरार कोशिकाओं की ऑक्सीजन की खपत का मूल्यांकन करता है, एकीकृत सेल में श्वसन समारोह reproducing और भी अधिक से अधिक mitochondrial इलेक्ट्रॉन परिवहन के बारे में जानकारी उपलब्ध कराने केRT क्षमता 6, 7। permeabilized कोशिकाओं पर बरकरार कोशिकाओं के लाभ में से एक यह है कि सेलुलर पर्यावरण बाधित नहीं है और माइटोकॉन्ड्रिया कोशिकाओं के पूरे घटकों के साथ संपर्क में हैं। आदेश सेलुलर प्लाज्मा झिल्ली permeabilize करने के लिए, इस तरह के रूप में digitonin डिटर्जेंट 8 इस्तेमाल किया गया है। हालांकि, mitochondrial बाहरी झिल्ली अखंडता यदि digitonin की अत्यधिक मात्रा में कार्यरत हैं समझौता किया जा सकता है। कि mitochondrial बाहरी झिल्ली अखंडता permeabilized कोशिकाओं में समझौता नहीं किया है इस बात की पुष्टि करने के लिए, digitonin अनुमापन सेलुलर permeabilization के लिए इष्टतम एकाग्रता का निर्धारण किया जाता है। इन प्रयोगों के लिए, कोशिकाओं श्वसन के माध्यम में resuspended हैं और digitonin एकाग्रता mitochondrial substrates और ADP, और श्वसन दर की उपस्थिति में respirometry द्वारा titrated है मापा जाता है। अक्षत, गैर permeabilized कोशिकाओं की श्वसन mitocho की उपस्थिति में प्रेरित नहीं हैndrial substrates और ADP। हालांकि, बाद में चरणबद्ध digitonin अनुमापन प्लाज्मा झिल्ली का क्रमिक permeabilization उपज होता है, और इष्टतम digitonin एकाग्रता प्राप्त की है। यह पूरा करने के लिए permeabilization श्वसन तक की वृद्धि से दिखाया गया है। Mitochondrial गुणवत्ता और बाहरी झिल्ली अखंडता exogenous साइटोक्रोम ग 2, 9 जोड़कर सत्यापित किया जा सकता। साइटोक्रोम ग mitochondrial इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला 10, 11, 12 के एक 12 केडीए इलेक्ट्रॉन प्रोटीन ले जा रहा है। यह mitochondrial intermembrane अंतरिक्ष में स्थानीय है, और ऑक्सीजन की खपत में शामिल है, जटिल चतुर्थ करने के लिए जटिल III से इलेक्ट्रॉनों ले। एक बार जब mitochondrial बाहरी झिल्ली क्षतिग्रस्त है, साइटोक्रोम ग जारी की है, और mitochondrial ऑक्सीजन की खपत कम हो जाता है। exogenous साइटोक्रोम ग के अलावा पर, mitochondrial श्वसन में किसी भी वृद्धि एक का संकेत हैmitochondrial बाहरी झिल्ली खलल डाल दिया।
Permeabilized कोशिकाओं, substrates और mitochondrial जटिल गतिविधि के अवरोधकों में विभिन्न प्रोटोकॉल का पालन जोड़ रहे हैं 3, 9। आदेश mitochondrial परिसर संचालित सांस की जांच करने के लिए दरों में उदाहरण के लिए, निम्नलिखित प्रोटोकॉल का उपयोग किया जा सकता है। कोशिकाओं के permeabilization के बाद, पहली जटिल मैं substrates Malate और ग्लूटामेट, जो सांस की श्रृंखला के लिए एक सब्सट्रेट के रूप NADH पैदा करते हैं और जटिल मैं बाद में, ADP एटीपी (राज्य 3, सक्रिय करने के लिए रूपांतरण के लिए जोड़ा जाता है की सक्रियता के भड़काने से प्रेरित है जटिल मैं निर्भर श्वसन)। बाद एक स्थिर संकेत तक पहुँच जाता है, rotenone (mitochondrial परिसर मैं अवरोध करनेवाला) जटिल आई Rotenone FADH से 2 succinate द्वारा पीछा किया जाता है को बाधित करने के लिए और जटिल द्वितीय (राज्य 3, सक्रिय जटिल द्वितीय निर्भर श्वसन) को सक्रिय करने के लिए किया जाता है। आदेश जटिल चतुर्थ निर्भर श्वसन, पहली जटिल III को मापने के लिएनिर्भर श्वसन antimycin एक (mitochondrial परिसर III अवरोध) को जोड़ने से हिचकते हैं। बाद में, जटिल चतुर्थ निर्भर श्वसन एस्कॉर्बेट और tetramethylphenylendiamine (TMPD) प्रशासन द्वारा प्रेरित है। TMPD श्वसन बफर में ऑटो-oxidize कर सकते हैं, इसलिए अधिक से अधिक जटिल चतुर्थ निर्भर श्वसन दर (राज्य 3) पहले और सोडियम azide, mitochondrial जटिल चतुर्थ के एक अवरोध के बाद इसके अलावा श्वसन दर घटाकर की जाती है। श्वसन प्रयोगों समानांतर एक एक नियंत्रण (unstimulated कोशिकाओं) के रूप में की सेवा में एक Oxygraph के दो कक्षों, अन्य युक्त प्रेरित कोशिकाओं में बाहर किया जा सकता है। जाहिर है, कोशिकाओं को विभिन्न तरीकों, जैसे पूर्व इलाज किया जा सकता है, mitochondrial कार्यों को प्रभावित कर दवाओं के साथ, पहले उनके ऑक्सीजन की खपत Oxygraph कक्ष में मापा जाता है। इस प्रोटोकॉल व्यक्ति mitochondrial श्वसन श्रृंखला परिसरों के कार्यात्मक परीक्षा की अनुमति देता है। इसके अलावा, एक अधिक से अधिक ADP उत्तेजित उपाय कर सकते हैंश्वसन permeabilized कोशिकाओं, palmitate के रूप में exogenous फैटी एसिड का उपयोग कर के (राज्य 3)। (: 1 दाढ़ अनुपात palmitate: बीएसए 6) इस प्रोटोकॉल में, सोडियम palmitate केंद्रित शेयरों अल्ट्रा फैटी एसिड मुक्त गोजातीय सीरम albumin (बीएसए) के साथ संयुग्मित हैं। बाद में, कोशिकाओं पहले digitonin और mitochondrial श्वसन के साथ permeabilized रहे हैं carnitine के अलावा द्वारा मूल्यांकन किया है और ADP (राज्य 3, अधिक से अधिक श्वसन) के अलावा द्वारा पीछा palmitate। फिर, oligomycin राज्य 4 (राज्य 4o) और श्वसन नियंत्रण अनुपात (रेसकोर्स रोड मूल्य) की नकल करने के लिए जोड़ा गया है राज्य 3 / राज्य 4o के रूप में गणना की है। β ऑक्सीकरण एसिटाइल सीओए के उत्पादन (जो टीसीए चक्र में प्रवेश करती है) और FADH 2 और NADH, जिनमें से इलेक्ट्रॉनों इलेक्ट्रॉन स्थानांतरित flavoprotein और β-hydroxyacyl सीओए डिहाइड्रोजनेज द्वारा इलेक्ट्रॉन परिवहन श्रृंखला के लिए पारित कर रहे हैं की पीढ़ी को बढ़ावा देता है। माइटोकॉन्ड्रिया फैटी एसिड चयापचय के केंद्र में हैं और बताया palmitate-बीएसए प्रोटोकॉल वसा की जांच के शोधकर्ताओं द्वारा इस्तेमाल किया जा सकताTy एसिड ऑक्सीकरण। बरकरार कोशिकाओं में, activators और mitochondrial जटिल गतिविधि के अवरोधकों एक अलग प्रोटोकॉल 6, 9 निम्नलिखित जोड़ रहे हैं। इन प्रयोगों के लिए, बहिर्जात substrates के अभाव में गैर permeabilized कोशिकाओं की पहली ऑक्सीजन की खपत (श्वसन दर phosphorylating) मापा जाता है। फिर, गैर phosphorylating श्वसन दर oligomycin के अलावा, जो mitochondrial एटीपी synthase के एक अवरोध है के बाद मापा जाता है। बाद में, protonophore कार्बोनिल साइनाइड पी trifluoromethoxyphenylhydrazone (FCCP) विभिन्न सांद्रता में प्रशासित किया जाता है और अधिक से अधिक mitochondrial uncoupled श्वसन दर मापा जाता है। ऐसे FCCP के रूप में Protonophores भीतर की झिल्ली की प्रोटॉन पारगम्यता में वृद्धि पैदा कर सकते हैं, chemiosmotic ढाल फैलने के लिए प्रोटॉनों के निष्क्रिय आंदोलन की इजाजत दी। प्रोटॉन पारगम्यता में वृद्धि ऑक्सीडेटिव श्वसन (कोई एटीपी उत्पादन) uncouples और ओ में वृद्धि लातीxygen खपत। बाद में, rotenone और antimycin एक mitochondrial श्वसन को बाधित करने के लिए जोड़ रहे हैं, और गैर mitochondrial श्वसन अन्य सभी श्वसन दर से घटाया जाता है।
ऑक्सीजन की खपत की दर कब 2 [pmol एक्स सेकंड -1 एक्स 10 -6 कोशिकाओं] (मिलियन कोशिकाओं प्रति ऑक्सीजन का प्रवाह), जो मात्रा विशेष ऑक्सीजन प्रवाह (बंद ऑक्सीजन चैम्बर में) विभाजित करके गणना की है, जेवी, हे के रूप में व्यक्त किया जा सकता 2 [pmol एक्स सेकंड -1 एक्स मिलीलीटर -1] सेल एकाग्रता द्वारा सेल कक्ष में (मात्रा प्रति कोशिकाओं की संख्या [10 6 कोशिकाओं ∙ मिलीलीटर 1]) 15। सेल-जन के विशिष्ट ऑक्सीजन प्रवाह, JO 2 [pmol एक्स सेकंड -1 एक्स मिलीग्राम -1], सेल प्रति प्रवाह है, कब 2 [pmol एक्स सेकंड -1 एक्स 10 -6 कोशिकाओं], सेल प्रति जन द्वारा विभाजित [मिलीग्राम ∙ 10 6 कोशिकाओं]; या मात्रा विशेष प्रवाह, जेवी, हे 2 [pmol एक्स सेकंड -1 एक्स मिलीलीटर -1], वॉल्यूम प्रति जन द्वारा विभाजितUme [मिलीग्राम ∙ मिलीलीटर 1]। JO 2 सेल प्रोटीन, सूखी वजन या सेल की मात्रा प्रति ऑक्सीजन प्रवाह है।
उच्च संकल्प respirometry का उपयोग करते हुए वर्तमान अध्ययन में, हम प्रयोग कर exogenous साइटोक्रोम ग मैं यह निर्धारित करने के लिए) पूरा सेलुलर प्लाज्मा झिल्ली permeabilization के लिए इष्टतम digitonin एकाग्रता (digitonin अनुमापन परख), द्वितीय) mitochondrial बाहरी झिल्ली अखंडता, iii) mitochondrial श्वसन श्रृंखला परिसरों मैं प्रोटोकॉल का वर्णन , द्वितीय और चतुर्थ बहिर्जात ADP और mitochondrial श्वसन श्रृंखला substrates, और की उपस्थिति में digitonin-permeabilized HepG2 कोशिकाओं में अधिक से अधिक सांस की दरों iv) बेसल, मिलकर और बरकरार कोशिकाओं का अधिक से अधिक uncoupled श्वसन (अधिक से अधिक इलेक्ट्रॉन परिवहन क्षमता) बहिर्जात substrates के अलावा बिना और ADP, एकीकृत सेल में श्वसन समारोह reproducing।
Protocol
Representative Results
Discussion
वर्तमान प्रोटोकॉल का उद्देश्य उच्च संकल्प respirometry का उपयोग करने के mitochondrial श्वसन श्रृंखला परिसरों '(मैं-चतुर्थ) श्वसन दर, अधिक से अधिक mitochondrial इलेक्ट्रॉन परिवहन प्रणाली की क्षमता और mitochondrial बाहरी झिल्ली अखंडत?…
Divulgations
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
This study was supported by the Swiss National Science Foundation (Grant nº 32003B_127619).
Materials
| ADP | Sigma | A 4386 | Chemical |
| Antimycin A | Sigma | A 8674 | Chemical, dissolve in ethanol |
| Ascorbate | Merck | 1.00127 | Chemical |
| BSA | Sigma | A 6003 | Chemical |
| FCCP | Sigma | C 2920 | Chemical, dissolve in ethanol |
| Countess automated cell counter | Thermo Fisher Scientific | n/a | Automated cell counting instrument |
| Cytochrome c | Sigma | C 7752 | Chemical |
| Digitonin | Sigma | D 5628 | Chemical, dissolve in DMSO |
| DMEM | Gibco | 31966021 | Medium |
| EGTA | fluka | 3779 | Chemical |
| FBS | Gibco | 26010-074 | Medium component |
| Glutamate | Sigma, | G 1626 | Chemical |
| Hepes | Sigma | H 7523 | Chemical |
| KCl | Merck | 1.04936 | Chemical |
| KH2PO4 | Merck | 1.04873 | Chemical |
| K-lactobionate | Sigma | L 2398 | Chemical |
| MgCl2 | Sigma | M 9272 | Chemical |
| O2k-Core: Oxygraph-2k | Oroboros Instruments | 10000-02 | High-resolution respirometry instrument |
| Oligomycin | Sigma | O 4876 | Chemical, dissolve in ethanol |
| Penicillin-streptomycin | Gibco | 15140122 | Chemical |
| Sodium azide | Sigma | S2002 | Chemical |
| Rotenone | Sigma | R 8875 | Chemical, dissolve in ethanol |
| Succinate | Sigma | S 2378 | Chemical |
| Taurine | Sigma | T 8691 | Chemical |
| TMPD | Sigma | T 3134 | Chemical |
| Trypsin | Sigma | T 4674 | Chemical |
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