High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

May 05, 2023

Quantification à haut débit basée sur l’image de la synthèse et de la distribution de l’ADN mitochondrial

01:31 min

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Préparation d’un mélange de siRNA pour la synthèse de l’ADN mitochondrial

00:45 min

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Transfection cellulaire et incorporation de 5-bromo-2'-désoxyuridine (BrdU) dans les cellules HeLa

01:19 min

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5-Bromo-2'-désoxyuridine (BrdU) Marquage de l'ADN mitochondrial dans les cellules HeLa

01:44 min

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Fixation des cellules HeLa avec Hoechst 33342 et blocage

01:05 min

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Ajout d’anticorps primaires et secondaires aux cellules HeLa transfectées pour surveiller la distribution de l’ADNmt

02:04 min

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Analyse quantitative d’images pour mesurer les niveaux d’ADNmt et d’expression génique dans les cellules HeLa transfectées

03:02 min

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Lukasz S. Borowski², Karolina Kasztelan³, Jolanta Czerwinska-Kostrzewska², Roman J. Szczesny

¹Faculty of Biology, Institute of Genetics and Biotechnology,University of Warsaw, ²Institute of Biochemistry and Biophysics,Polish Academy of Sciences, ³International Institute of Molecular and Cell Biology in Warsaw

Summary

Une procédure d’étude de la dynamique du métabolisme de l’ADN mitochondrial (ADNmt) dans les cellules à l’aide d’un format de plaque multipuits et d’une imagerie automatisée par immunofluorescence pour détecter et quantifier la synthèse et la distribution de l’ADNmt est décrite. Cela peut être utilisé pour étudier les effets de divers inhibiteurs, stress cellulaires et silençage génique sur le métabolisme de l’ADNmt.