High-Throughput Image-Based Quantification of Mitochondrial DNA Synthesis and Distribution

Lukasz S. Borowski; Karolina Kasztelan; Jolanta Czerwinska-Kostrzewska; Roman J. Szczesny

doi:10.3791/65236

High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

May 05, 2023

Quantificação baseada em imagens de alto rendimento da síntese e distribuição do DNA mitocondrial

01:31 min

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Preparação de Mistura de SiRNA para Síntese de DNA Mitocondrial

00:45 min

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Transfecção celular e incorporação de 5-Bromo-2'-desoxiuridina (BrdU) em células HeLa

01:19 min

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5-Bromo-2'-desoxiuridina (BrdU) Marcação do DNA mitocondrial em células HeLa

01:44 min

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Fixação de células HeLa com Hoechst 33342 e bloqueio

01:05 min

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Adição de anticorpos primários e secundários às células HeLa transfectadas para monitorar a distribuição do mtDNA

02:04 min

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Análise Quantitativa de Imagens para Mensuração do MtDNA e Níveis de Expressão Gênica em Células HeLa Transfectadas

03:02 min

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Lukasz S. Borowski², Karolina Kasztelan³, Jolanta Czerwinska-Kostrzewska², Roman J. Szczesny

¹Faculty of Biology, Institute of Genetics and Biotechnology,University of Warsaw, ²Institute of Biochemistry and Biophysics,Polish Academy of Sciences, ³International Institute of Molecular and Cell Biology in Warsaw

Summary

Um procedimento para estudar a dinâmica do metabolismo do DNA mitocondrial (mtDNA) em células usando um formato de placa multi-poço e imagens automatizadas de imunofluorescência para detectar e quantificar a síntese e distribuição do mtDNA é descrito. Isso pode ser usado para investigar os efeitos de vários inibidores, estresses celulares e silenciamento gênico no metabolismo do mtDNA.