High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

May 05, 2023

Quantificazione basata su immagini ad alto rendimento della sintesi e della distribuzione del DNA mitocondriale

01:31 min

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Preparazione della miscela di siRNA per la sintesi del DNA mitocondriale

00:45 min

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Trasfezione cellulare e incorporazione di 5-Bromo-2'-deossiuridina (BrdU) nelle cellule HeLa

01:19 min

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5-Bromo-2'-deossiuridina (BrdU) marcatura del DNA mitocondriale nelle cellule HeLa

01:44 min

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Fissazione delle cellule HeLa con Hoechst 33342 e blocco

01:05 min

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Aggiunta di anticorpi primari e secondari alle cellule HeLa trasfettate per monitorare la distribuzione del mtDNA

02:04 min

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Analisi quantitativa delle immagini per misurare il mtDNA e i livelli di espressione genica nelle cellule HeLa trasfettate

03:02 min

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Lukasz S. Borowski², Karolina Kasztelan³, Jolanta Czerwinska-Kostrzewska², Roman J. Szczesny

¹Faculty of Biology, Institute of Genetics and Biotechnology,University of Warsaw, ²Institute of Biochemistry and Biophysics,Polish Academy of Sciences, ³International Institute of Molecular and Cell Biology in Warsaw

Summary

Viene descritta una procedura per studiare la dinamica del metabolismo del DNA mitocondriale (mtDNA) nelle cellule utilizzando un formato di piastra multi-pozzetto e l’imaging automatizzato di immunofluorescenza per rilevare e quantificare la sintesi e la distribuzione del mtDNA. Questo può essere ulteriormente utilizzato per studiare gli effetti di vari inibitori, stress cellulari e silenziamento genico sul metabolismo del mtDNA.