High-Throughput Quantification of the Synthesis and Distribution of mtDNA

May 05, 2023

Bildbaserad kvantifiering av mitokondriell DNA-syntes och distribution med hög kapacitet

01:31 min

•

Framställning av siRNA-blandning för mitokondriell DNA-syntes

00:45 min

•

Celltransfektion och 5-brom-2'-deoxiuridin (BrdU) inkorporering i HeLa-celler

01:19 min

•

5-bromo-2'-deoxiuridin (BrdU) märkning av mitokondriellt DNA i HeLa-celler

01:44 min

•

HeLa-cellfixering med Hoechst 33342 och blockering

01:05 min

•

Tillägg av primära och sekundära antikroppar till de transfekterade HeLa-cellerna för att övervaka mtDNA-fördelningen

02:04 min

•

Kvantitativ bildanalys för att mäta mtDNA och genuttrycksnivåer i de transfekterade HeLa-cellerna

03:02 min

•

Lukasz S. Borowski², Karolina Kasztelan³, Jolanta Czerwinska-Kostrzewska², Roman J. Szczesny

¹Faculty of Biology, Institute of Genetics and Biotechnology,University of Warsaw, ²Institute of Biochemistry and Biophysics,Polish Academy of Sciences, ³International Institute of Molecular and Cell Biology in Warsaw

Summary

En procedur för att studera dynamiken i mitokondriellt DNA (mtDNA) metabolism i celler med hjälp av ett multi-well plattformat och automatiserad immunofluorescensavbildning för att detektera och kvantifiera mtDNA-syntes och distribution beskrivs. Detta kan vidare användas för att undersöka effekterna av olika hämmare, cellulära påfrestningar och gendämpning på mtDNA-metabolism.