Подготовка диссоциированных Мышь корковых культур Нейрон
Summary
Это видео показывает процедуру для создания нейронных культур с конца эмбриона и раннего послеродового коры мыши. Эти культуры могут быть использованы для иммуноцитохимии, биохимии, электрофизиологии, кальция и натрия изображений и обеспечить платформу для изучения нейронных развития трансгенных животных, которые несут послеродового летальная мутация гена.
Abstract
Это видео поможет вам процесс создания корковых нейронов культур с конца эмбриона и раннего постнатального мозга мыши. Эти культуры могут быть использованы для разнообразных приложений, включая иммуноцитохимии, биохимии, электрофизиологии, кальция и натрия с изображениями, белка и / или РНК изоляции. Эти культуры также предоставляют платформу для изучения нейронных развития трансгенных животных, которые несут конце эмбриона или послеродового летальная мутация гена. Процедура сравнительно простой, требует некоторого опыта в ткани культуры и техники не должно занять больше времени, чем два-три часа, если вы должным образом подготовлены. Тщательное разделение корковых кожуру от таламо-корковые волокна тракта позволит сократить количество нежелательных без нервных клеток. Чтобы повысить урожайность нервных клеток растирают кусков корковой ткани мягко после шага инкубации фермента. Это необходимо, так как предотвращает ненужное повреждение клеток и преждевременной гибели нейронов клетки. С этих культур ведутся в отсутствие клеток глии подачи, они также предлагают дополнительное преимущество растущих культур обогащенные нейронами.
Protocol
Divulgazioni
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| 5-Fluoro-2′-deoxyuridine | Sigma | F0503 | ||
| Sodium Chloride | Sigma | S9625 | ||
| Vibraslicer | Campden Instruments Ltd. | |||
| Potassim Chloride | Sigma | P4504 | ||
| Sodium Phosphate Dibasic | Sigma | S0876 | ||
| Potassium Phosphate Monobasic | Sigma | P5379 | ||
| Hepes | Sigma | H3375 | ||
| D (+)-Glucose | Sigma | G8270 | ||
| Sucrose | Sigma | S0389 | ||
| Poly-D-Lysine | Sigma | P7280 | ||
| B27 Supplement | Invitrogen (Gibco) | 17504-044 | ||
| Neurobasal Media (NBM) | Invirtogen (Gibco) | 21103-049 | ||
| 2-Amino-5-phosphonopentanoic acid | Sigma | A5282 | ||
| Bovine Albumin | Sigma | A7030 | ||
| Trypsin Inhibitor | Sigma | T9253 | ||
| Sodium Hydroxide, 1N solution | Fisher | SS266-1 | ||
| L-Cysteine | Sigma | C7755 | ||
| Bacto Agar | Difco | 0140-01 | ||
| Papain | Worthington | LS 03126 | ||
| Sterile 0.2 µm Syringe Filter | Fisher | DDA02025S0 | ||
| Glass Coverslips, No1, Ø12mm | Bellco Glass Inc. | 1943-00012 | ||
| Minimum Essential Media (MEM) | Invitrogen (Gibco) | 11090-081 | with Earle’s salts without L-glutamine, needed for growing non-neuronal cultures | |
| Penicillin/Streptomycin | Invitrogen (Gibco) | 15070-063 | for non-neuronal culture | |
| Fetal Bovine Serum | Invitrogen (Gibco) | 16140-071 | needed for non-neuronal cultures | |
| Nunclon “Triple Flask” Tissue Culture Bottle | Fisher | 12-565-25 | Use for non-neuronal cultures. these flasks are very convenient when producing “conditioned Neurobasal Media/B27”, but any other tissue culture flasks or dishes can be used instead. | |
| Glass bottom “Imaging dishes” | MatTek Corp. | P35G-1.5-10-C | Glass bottomed, Ø35mm culture dishes ideal for Calcium or Sodium Imaging when using an inverted imaging setup. But expensive! |
