Quantificazione dell'adesione delle cellule tumorali nelle Criosezioni del linfonodo

Elisa  Helena Farias Jandrey; Mayra  Akemi Kuroki; Anamaria  Aranha Camargo; Erico  Tosoni Costa

doi:10.3791/60531

Articolo metodologico

Quantificazione dell'adesione delle cellule tumorali nelle Criosezioni del linfonodo

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DOI:

10.3791/60531

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9 febbraio 2020

Elisa Helena Farias Jandrey¹ , Mayra Akemi Kuroki¹ , Anamaria Aranha Camargo¹ , Erico Tosoni Costa¹

¹Molecular Oncology Center, Hospital Sírio-Libanês

In questo articolo

Sommario

Qui, descriviamo un metodo semplice ed economico che permette la quantificazione delle cellule tumorali adesive alle criosezioni dei linfonodi (LN). Le cellule tumorali aderenti a LN sono facilmente identificabili dalla microscopia leggera e confermate da un metodo basato sulla fluorescenza, dando un indice di adesione che rivela l'affinità di legame delle cellule tumorali al parenchyma LN.

Abstract

I linfonodi che drenano di tumore (LN) non sono solo filtri di rifiuti prodotti da tumore. Sono uno dei siti regionali più comuni di residenza provvisoria di cellule tumorali diffuse in pazienti con diversi tipi di cancro. La rilevazione di queste cellule tumorali che risiedano da LN è un importante biomarcatore associato a prognosi infaminante e decisioni di terapia adiuvante. Recenti modelli murini hanno indicato che le cellule tumorali che risiedivano l'LN potrebbero essere una fonte sostanziale di cellule maligne per metastasi distanti. La capacità di quantificare l'adiposisia delle cellule tumorali al parenchyma LN è un indicatore critico nella ricerca sperimentale che si concentra sull'identificazione dei geni o sui percorsi di segnalazione rilevanti per la diffusione linfatica/metastatica. Poiché le LN sono strutture 3D complesse con una varietà di aspetti e composizioni in sezioni di tessuto a seconda del piano di sezione, le loro matrici sono difficili da replicare sperimentalmente in vitro in modo completamente controllato. Qui, descriviamo un metodo semplice ed economico che permette la quantificazione delle cellule tumorali adesive alle criosezioni LN. Utilizzando sezioni seriali dello stesso LN, adattiamo il metodo classico sviluppato da Brodt per utilizzare etichette non radioattive e contiamo direttamente il numero di cellule tumorali aderenti per superficie LN. Le cellule tumorali aderenti a LN sono facilmente identificabili mediante microscopia leggera e confermate da un metodo basato sulla fluorescenza, fornendo un indice di adesione che rivela l'affinità di legame cellulare con il parenchyma LN, che è una prova suggestiva di alterazioni molecolari nel legame di affinità delle integrine alle loro legature LN correlate.

Introduzione

La metastasi del cancro è la ragione principale per il fallimento del trattamento e l'aspetto dominante pericoloso per la vita del cancro. Come postulato 130 anni fa, la diffusione metastatica si traduce quando un'élite di cellule tumorali diffuse (DTC, i "semi") acquisisce specifiche abilità biologiche che permettono loro di eludere i siti primari e stabilire una crescita maligna in siti lontani (il "suolo")¹. Recentemente, sono emersi diversi nuovi concetti riguardanti le relazioni "seme e suolo", come l'induzione di nicchie premetastatiche (concettualizzate come un "terreno fertile" necessario per i "semi" per prosperare), l'auto-semina dei ....