Détection de Neu1 activité sialidase dans la régulation activation du récepteur Toll-like
Summary
Le dosage de la sialidase est une approche simple technique qui élucidera roman mécanisme moléculaire (s) de capteurs TLR des infections microbiennes et leur implication dans les maladies inflammatoires au niveau des récepteurs à la surface cellulaire de macrophages vivre.
Abstract
Mammifères récepteurs Toll-like (TLR) sont une famille de récepteurs qui reconnaissent pathogène motifs moléculaires associés. Non seulement les TLR capteurs crucial de microbes (par exemple, virus, bactéries et parasites) des infections, mais elles jouent aussi un rôle important dans la physiopathologie des maladies infectieuses, les maladies inflammatoires et, éventuellement, dans les maladies auto-immunes. Ainsi, l'intensité et la durée des réponses TLR contre les maladies infectieuses doit être étroitement contrôlée. Il s'ensuit que la compréhension de l'intégrité structurale des récepteurs de capteurs, de leurs interactions ligand et éléments de signalisation est essentielle pour la protection immunologique ultérieure. Elle permettrait également d'importantes opportunités de modification de la maladie grâce à la manipulation du capteur. Bien que les voies de signalisation des TLR capteurs sont bien caractérisés, les paramètres contrôlant les interactions entre les capteurs et leurs ligands restent encore mal définies. Nous avons récemment identifié un nouveau mécanisme d'activation TLR par son ligand naturel, qui n'a pas été observé précédemment 1,2. Il suggère que l'activation induite par des ligands de TLR est étroitement contrôlée par l'activation Neu1 sialidase. Nous avons également signalé que Neu1 réglemente rigoureusement les récepteurs TrkA et neurotrophine comme TrkB 3, qui impliquent Neu1 et de la matrice métalloprotéinase-9 (MMP-9) diaphonie dans un complexe avec les récepteurs 4. Le test a été initialement sialidase utiliser pour trouver un ligand roman, thymoquinone, dans l'activation de Neu4 sialidase à la surface cellulaire de macrophages, cellules dendritiques et des cellules de fibroblastes par l'intermédiaire des protéines GPCR Gαi et MMP-9 5. Pour les récepteurs TLR, nos données indiquent que Neu1 sialidase est déjà dans un complexe avec les récepteurs TLR-2, -3 et -4, et est induite lors de la liaison du ligand du récepteur soit. Activé Neu1 s'hydrolyse sialidase sialyl α-2 ,3-β-galactosyl liés résidus éloignés de liaison du ligand pour enlever encombrement stérique au TLR-4 dimérisation, MyD88/TLR4 complexes de recrutement, l'activation de NFkB et les réponses des cellules pro-inflammatoires. Dans un rapport de collaboration, sialidase Neu1 a été montré pour réglementer la phagocytose en 6 cellules macrophages. Pris ensemble, le dosage sialidase nous a fourni des idées puissantes pour les mécanismes moléculaires de l'activation du récepteur induite par le ligand. Bien que la relation précise entre Neu1 sialidase et l'activation des TLR, récepteurs Trk n'a pas encore été totalement élucidé, cela représenterait une nouvelle approche ou pionnière de voies de régulation cellulaire.
Protocol
Discussion
En utilisant le dosage nouvellement développée pour détecter l'activité sialidase dans les cellules macrophages vivants 2, nous avons utilisé cette technologie pour détecter l'activité de l'activité sialidase sialidase induite par le ligand en direct BMC-2 cellules macrophages de manière dose-dépendante aussi bien en direct DC-2.4 des cellules dendritiques , HEK-TLR4/MD2, HEK293, les cellules SP1 adénocarcinomes mammaires, WT humaine et 1140F01 et WG0544 de type I des cellules de fibrob…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Prise en charge partielle par des subventions à MRS est de sciences naturelles et en génie du Canada (CRSNG), le Harry Botterell Fondation pour la recherche en neurosciences, l'ARC, et la recherche cardiovasculaire et Kelly Garfield Fonds de développement. SRA est récipiendaire du Prix de la Reine de la recherche universitaire et la Robert J. Wilson Fellow. PJ est un récipiendaire du Prix d'études supérieures de la Reine et le Robert J. Wilson Fellow. AG et SA sont récipiendaires du Prix d'études supérieures de la Reine. SF a été le récipiendaire de la bourse d'études supérieures en science et technologie (BÉSOST). AG est le récipiendaire de la bourse de la Reine Franklin Bracken supérieures. SA est le récipiendaire de la bourse de la Reine RS McLaughlin supérieures.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| DMEM | Gibco, Rockville, MD | |||
| 4-MUNANA | Biosynth International Inc., Itasca, IL, USA | |||
| Fetal calf serum | HyClone, Logan, Utah, USA | |||
| DakoCytomation, Fluorescent Mounting Media | DAKO North America, Inc., Carpintenia, CA | S3023 | 15 mL | |
| Tamiflu (Oseltamivir Phosphate) | Hoffman La Roche |
References
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