Точные и простые измерения провоспалительных цитокинов IL-1β использованием Всего Пробирная стимуляция крови
Summary
Мы опишем простой иммуноанализа для измерения производство провоспалительных цитокинов, таких как IL-1 бета производства, у пациентов с autoinflammatory фенотипы. При активации клеток в целом посевы крови с возбудителем связанные молекулярные модели, в частности, с липополисахарид, секрецию цитокинов может быть удобно оценивать в целом супернатанты крови.
Abstract
Воспалительные процессы в результате секреции растворимых медиаторов иммунных клеток, приводят к различным проявлениям в коже, суставах и других тканях, а также нарушении гомеостаза цитокинов. Врожденная иммунная система играет ключевую роль в распознавании патогенов и других эндогенных раздражителей опасности. Одним из основных цитокинов выпущен врожденного иммунитета клеток интерлейкина (IL) -1. Таким образом, мы используем весь анализ стимуляции крови, чтобы измерить секрецию воспалительных цитокинов и, в частности из провоспалительных цитокинов IL-1β 1, 2, 3.
Пациенты с генетическими дисфункции иммунной системы вызывает autoinflammatory синдромов показать преувеличенные выпуск зрелого ИЛ-1β при стимуляции ЛПС в одиночку. Для того чтобы оценить врожденный иммунный компонент пациентов с воспалительными связанных патологий, мы используем специальный иммунологический анализ для выявления клеточный иммунный ответ на патоген-связанные молекулярные модели (PAMPs), таких как грамотрицательные бактериальные эндотоксины, липополисахариды (ЛПС ). Эти PAMPs признаны возбудителя рецепторы распознавания (РРСС), которые находятся на клетки иммунной системы 4, 5, 6, 7. Первичного сигнала, ЛПС, в сочетании с вторичным сигнал, АТФ, необходимой для активации inflammasome, multiprotein комплекса, процессы про-IL-1β в своей зрелой, биологически активные формы 4, 5, 6, 8, 9, 10.
Весь анализ крови требует минимальных манипуляций образец для оценки продукции цитокинов по сравнению с другими методами, которые требуют трудоемких изоляции и культивирования конкретных клеточных популяций. Этот метод отличается от других все анализы крови стимуляции, а, скорее, чем разбавления образцов с отношением RPMI средства массовой информации, мы выполняем белых клеток крови непосредственно из разбавленных цельной крови и, следовательно, стимулируют известно количество белых кровяных клеток в культуре 2. Результаты данного анализа крови целом продемонстрировать новый метод полезным для выяснения пациента когорты представления с autoinflammatory pathophysiologies.
Protocol
Discussion
Весь анализ крови описанная простой метод, который более точно имитирует физиологические условия по сравнению с другими методами, которые требуют изоляторе и обширные обработки образца и манипуляции. Этот метод использует Cellometer Видение с АО для подсчета белых кровяных клеток в цельн?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Это исследование было поддержано Внутренние программы исследований Национального института артрита и костно-мышечной и кожных заболеваний Национального института здравоохранения.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium Heparin Blood Collection Tubes | BD | 366480 | ||
| RPMI 1640 Media | GIBCO | 21870-100 | ||
| Acridine Orange | Invitrogen | A3568 | ||
| Cellometer Vision | Nexcelom Bioscience | Contact company for instrument information | ||
| Cellometer Cell Counting Chambers | Nexcelom Bioscience | CHT4-SD100 | ||
| 24-well Tissue Culture Plate | Corning Costar | 3524 | ||
| Ultra Pure E. coli K12 LPS | InvivoGen | tlrl-eklps | ||
| Adenosine 5´-tripohasphate disodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | A26209 | ||
| Bio-plex 200 system | Bio-Rad | Contact company for instrument information | ||
| Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay | Bio-Rad | x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest |
References
- Martinon, F., Mayor, A., Tschopp, J. The inflammasomes: guardians of the body. Annu Rev Immunol. 27, 229-265 (2009).
- Thurm, C. W., Halsey, J. F. Measurement of cytokine production using whole blood. Curr Protoc Immunol. 66, 7-18 .
- Mariathasan, S. Cryopyrin activates the inflammasome in response to toxins and ATP. Nature. 440, 228-232 (2006).
- Gabay, C., Lamacchia, C., Palmer, G. IL-1 pathways in inflammation and human diseases. Nat Rev Rheumatol. 4, 232-241 (2010).
- Franchi, L., Elgenbrod, T., Muñoz-Planillo, R., Nuñez, G. The inflammasome: a caspase-1-activation platform that regulates immune responses and disease pathogenesis. Nat Immunol. 3, 241-247 (2009).
- Sims, J. E., Smith, D. E. The IL-1 family: regulators of immunity. Nat Rev Immunol. 2, 89-102 (2010).
- Haug, R., Joø, G. B., Westvik, A. B., Kierulf, P. Chemokine production and pattern recognition receptor (PRR) expression in whole blood stimulated with pathogen-associated molecular patterns (PAMPs. Cytokine. 32, 304-315 (2005).
- Netea, M. G. Differential requirement for the activation of the inflammasome for processing and release of IL-1bin monocytes and macrophages. Blood. 113, 2324-2335 (2009).
- Latz, E. The inflammasomes: mechanisms of activation and function. Curr Opin Immnol. 22, 28-33 (2010).
- Masters, S. L., Simon, A., Aksentijevich, I., Kastner, D. L. Horror autoinflammaticus: the molecular pathophysiology of autoinflammtory disease. Annu Rev Immunol. 27, 621-668 (2009).
