전체 혈액 자극 분석을 사용하여 프로 염증성 시토킨 IL - 1β의 정확하고 간단한 측정
Summary
우리는 autoinflammatory phenotypes와 함께 제시 환자에있어서 IL – 1 베타의 생산과 같은 프로 염증성 크린 시토킨의 생산, 측정하는 간단한 면역 분석법을 설명합니다. 특히 lipopolysaccharide와 병원체 – 관련된 분자 패턴과 전체 혈액 배양에서 세포를 활성화하여, 시토킨 분비가 편리 전체 혈액 supernatants에서 평가하실 수 있습니다.
Abstract
면역 세포에 의해 용해 중재자의 분비로 인한 염증성 과정, 피부, 관절과 기타 조직뿐만 아니라 변경 시토킨 항상성의 다양한 발현로 이어집니다. 타고난 면역 체계는 병원균과 다른 내생 위험 자극의 인식에 중요한 역할을 담당하고 있습니다. 타고난 면역 세포에 의해 발표 주요 크린 시토킨 중 하나는 인터루킨 (IL) -1입니다. 따라서, 우리는 염증 크린 시토킨의 분비를 측정하기 위해, 특히 프로 염증 시토킨 IL – 1β 1, 2, 3의 전체 혈액 자극 분석을 활용한다.
autoinflammatory syndromes를 일으키는 본래 면역 시스템의 유전자 장애 환자는 혼자 LPS로 자극시 IL – 1β 성숙의 과장 릴리스를 보여줍니다. 염증 – 관련 pathologies로 현재 환자의 타고난 면역 구성 요소를 평가하기 위해, 우리는 그람 음성 세균의 내독소 같은 병원체 – 관련 분자 패턴 (PAMPs)에 세포 면역 반응을 감지하는 특정 면역 분석법, lipopolysaccharide (LPS를 사용하여 ). 이러한 PAMPs은 본래 면역 체계 4, 5, 6, 7의 세포에서 찾을 수있는 병원체 인식 수용체 (PRRs)에 의해 인정됩니다. 보조 신호, ATP, inflammasome의 활성화, 그 성숙, bioactive 형태 4, 5, 6, 8, 9 프로 IL – 1β 처리하는 multiprotein 복합 필요한 함께 기본 신호, LPS, 10.
전체 혈액 분석은 특정 세포 집단의 노동 집약적인 고립과 culturing을 필요로 다른 방법에 비해 시토킨 생산을 평가하기 위해 최소한의 샘플 조작이 필요합니다. 이 방법은 다른 모든 혈액 자극의 assays 다릅니다; 오히려 RPMI 미디어의 비율로 샘플을 diluting보다, 우리는 백혈구가 희석 전체 혈액에서 직접 계산되므로, 문화 2 백혈구의 알려진 숫자를 자극 수행합니다. 이 특정 전체 혈액 분석의 결과는 autoinflammatory pathophysiologies와 함께 제시 환자의 동료를 elucidating에 도움이 소설 기법을 보여줍니다.
Protocol
Discussion
설명 전체 혈액 분석은 세포 분리 및 광범위한 시료 처리 및 조작을 필요로 다른 기술에 비해보다 밀접하게 생리 조건을 모방하는 간단한 방법입니다. 이 방법은 전체 혈액의 백혈구를 계산하기 때문에, 정확하게 셀 번호에 따라 샘플을 표준화하는 방법을 제공하기 위해 AO와 Cellometer 비전을 활용합니다.
그것은이 분석을 위해, 전체 혈액은 다른 anticoagulants가 칼슘 chelators을 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 연구는 관절염과 미 국립 보건원의 Musculoskeletal와 피부 질환의 국립 연구소의 교내 연구 프로그램에 의해 지원되었다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium Heparin Blood Collection Tubes | BD | 366480 | ||
| RPMI 1640 Media | GIBCO | 21870-100 | ||
| Acridine Orange | Invitrogen | A3568 | ||
| Cellometer Vision | Nexcelom Bioscience | Contact company for instrument information | ||
| Cellometer Cell Counting Chambers | Nexcelom Bioscience | CHT4-SD100 | ||
| 24-well Tissue Culture Plate | Corning Costar | 3524 | ||
| Ultra Pure E. coli K12 LPS | InvivoGen | tlrl-eklps | ||
| Adenosine 5´-tripohasphate disodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | A26209 | ||
| Bio-plex 200 system | Bio-Rad | Contact company for instrument information | ||
| Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay | Bio-Rad | x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest |
References
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