Summary

심장 기능 면역 세포의 분리

Published: December 05, 2011
doi:

Summary

마음에서 기능적 면역 세포를 분리를위한이 방법은 이러한 세포의 감소 반응의 결과로, 원치 않는 면역 세포 활성화의 원인이 collagenase의 소화의 종래의 방법에 대한 대안을 제공합니다. 격리 우리의 방법은 효소 소화와 관련된 문제를 피함으로써 기능 심장병 면역 세포를 산출.

Abstract

심장 면역 세포들은 많은 심장 질환의 병리 리모델링에서 재생 역할에 대한 관심을 쫒아오고 있습니다 마스트 세포, T – 세포 및 macrophages 포함 1-5 이들 면역 세포;. 저장하고 크린 시토킨 및 포함하여 생물학적으로 활성 중재자 다양한 릴리스 같은 tryptase 같은 프로 테아제. 6-8이 중재자는 매트릭스 metalloproteinases를 활성화하거나 modulating 심장 섬유아 세포 '기능에 의해 콜라겐 축적을 유발하여 세포외 기질 대사의 주요 선수로 표시되었습니다. 9-11하지만, 심장 면역 세포를 분리에 사용할 기술이있다 그들은 심근 조직을 소화 박테리아 collagenase을 사용하기 때문에 문제가되었습니다. 이 기술은 면역 세포의 활성화 및 따라서 기능의 손실을 초래합니다. 예를 들어, 심장 마스트 세포가 degranulation의 원인이 화합물에 훨씬 적은 반응이된다. 12 따라서, 우리는 t을 허용하는 기술을 개발그는 심장 질환에서 이러한 세포의 역할에 대한 이해로 이어질 것입니다 기능적 심장 면역 세포의 분리. 13, 14

이 방법은 심장의 해부 쥐의 검상 돌기 프로세스, 겨드랑이와 낫 모양의 제품 인대의 위치, 그리고 심낭과 친숙이 필요합니다. 이러한 랜드마크 프로 시저의 성공을 증가하고 심장 면역 세포의 높은 수율을 보장하기 위해 중요합니다. 이러한 격리 심장 면역 세포는 그 기능 표현형, 만기, 그리고 다른 심장 세포와 공동 배양 실험들은 상호 작용의 더 나은 이해를 얻을 수의 특성에 사용될 수 있습니다.

Protocol

1. 행크스 '잔액 소금 솔루션의 준비 (HBSS) 압력솥 1 L의 유리 비커는 1000 ML은 실린더 졸업하고, 바 저어. 두 번 증류수로 900 ML 표시에 autoclaved 1 L의 유리 비커에 HBSS 분말 솔루션 Reconstitute. Hepes 나 + 소금 3.4 g와 HBSS 용액을 혼합하고 집중 HCL 또는 NaOH을 사용 7.35-7.41 사이의 값을 산도를 조정합니다. 원하는 산도가 획득하고 안정적​​인 유지되면 알부민이 완전히 해?…

Discussion

심장 면역 세포를 분리 이러한 방법은 일반적으로 전통적인 효소 소화 절연 기술 중에 발생하는 원치 않는 작동하지 않고 자신의 기능, 표현형, 그리고 성숙의 분석을 수 있습니다. 이 기술을 얻은 세포의 평균 총수는 쥐 심장 당 400,000 주위되며, 이러한 세포의 차동 얼룩 및 유동세포계측법 분석 T – lymphocytes의 혼합 인구 (~ 70 %), macrophages (~ 12 %)와 마스트 세포와를 나타냅니다 이 기법의 사용. (~ 12 …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

이 작품은 UNCF – 머크 대학원 과학 연구 논문 장학생 (JLM), 국립 심장, 폐, 및 혈액 연구소 부여 RO1 – HL – 62228 (JSJ)와 RO1 – HL – 073990 (JSJ)에 의해 지원되었다.

Materials

Name of Reagent and Equipment Company Catalogue Number Comments
Hanks’ Balanced Salt Sigma H4891 One bottle makes 1 L of Hanks’ Balance Salt
Solution. Reconstitute Hanks’ Balance Salt
Solution as a part of the procedure.
Antibiotic- Antimyotic Gibco 15240-062  
HEPES Sigma H3784  
Bovine Serum Albumin Sigma A3912  
250 mL Nalogene Filter Bottle Thermoscientific 157-0020  
12 N HCL Fisher Scientific CAS 7647-01-0 For 6 N, add equal volumes of HCL to deionized water.
10 N NaOH Fisher Scientific SC267 For 5 N, add equal volumes of NaOH to deionized water.
Double Distilled Water      

Table of Specific Equipment:

Name of Reagent and Equipment Company Catalogue Number Comments
3-O Suture Silk Braided Ethicon Products SA64H  
Small Animal Ventilator CWE Incorporated SAR-830 Set breathing rate to 40.5 breaths per min.
Bevel 18 gauge needle BD Biosciences 305199 Trim needle by 1/2 to 3/4 of its original length for use as a tracheal tube.
Teflon Tip (with needle removed) of 24-gauge Baxter quick-cath catheter Baxter 2N111 Reduce the Teflon Tip length by 1/2 to 3/4.
10 cc syringe Fisher Scientific 14-823-16B  
15 mL Falcon Tubes BD Biosciences 352097  
Sorvall RT6000B Refrigerated Centrifuge Fisher Scientific 75-004-377 Remember to pre-cool and keep at 4°C.
Hyclone Thermoscientific S300030.02  
Hemocytometer Hausser Scientific HS-LB-1483  

References

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Cite This Article
McLarty, J. L., Meléndez, G. C., Spencer, W. J., Levick, S. P., Brower, G. L., Janicki, J. S. Isolation of Functional Cardiac Immune Cells. J. Vis. Exp. (58), e3020, doi:10.3791/3020 (2011).

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