뇌 조직의 만성 Optogenetic의 자극을위한 광섬유 주입
Summary
optogenetics의 개발은 이제 정확하게 유전자 정의 뉴런과 회로를 자극 할 수있는 방법을 모두 제공합니다<em> 체외에서</em>와<em> 생체 내</em>. 여기 뇌 조직의 만성 photostimulation에 광 섬유의 조립 및 주입을 설명합니다.
Abstract
neuronal 연결의 Elucidating 패턴은 임상과 기초 모두 신경 과학에 대한 도전이었다. 전기 생리학은 시냅스 연결의 패턴을 분석 황금 표준 왔지만 짝 electrophysiological 레코딩 성가신와 실험적으로 제한을 모두 할 수 있습니다. optogenetics의 발달은 체외 1과 생체 2,3에서 모두 뉴런과 회로를 자극 할 수있는 우아한 방법을 도입하였습니다. 이산 neuronal 인구에 옵신 표현을 유도 세포 유형의 특정 발기인의 활동을 이용하여, 하나는 정확하게 구별 회로 4-6에서 유전자 정의 neuronal 하위 유형을 자극 할 수 있습니다. 전기 자극 및 / 또는 약리 조작 등의 뉴런을, 자극에 잘 설명 방법은 종종 침입 세포 유형의 무차별이고, 주변 조직에 손상을 줄 수 있습니다. 이러한 제한은 전형적인 시냅스 기능 및 / 또는 회로의 동작을 변경 수 있습니다. 또한, 인해조작의 성격에, 현재의 방법은 종종 급성 및 단말 있습니다. Optogenetics는 비교적 무해한 방식으로 뉴런을 자극하고, 유전자 타겟으로 뉴런에 할 수있는 능력을 갖게. 생체 optogenetics에 관한 연구의 대부분은 현재 주입 캐뉼라 6,7를 거치게 광학 섬유를 사용하지만,이 방법의 한계는 광섬유의 반복 삽입과 손상된 뇌 조직과 캐뉼라 내부의 섬유의 잠재적 인 파손이 포함되어 있습니다. optogenetics의 급성장 분야 감안할 때, 만성 자극의 더 신뢰할 수있는 방법은 최소한의 부수적 인 조직 손상과 장기 연구를 촉진 할 필요가 있습니다. 여기 효과적이고 우아 스파르타 외에 설명 된 방법을 보완하기 위해 비디오 기사 등의 수정 프로토콜을 제공합니다. 8 anesthetized 마우스의 두개골로 광섬유 이식 및 영구 고정의 제조뿐만 아니라의 조립에 섬유광 커플러는 광원에 임플란트를 연결. 고체 레이저를 광섬유로 연결 임플란트는 만성 적은 조직 손상 9 작은 분리, tethers을 사용하여 기능 neuronal 회로를 photostimulate 할 수있는 효율적인 방법을 할 수 있습니다. 광섬유 임플란트를 영구적으로 고정을 제공 일관 최소한의 조직 손상을 갖춘 10 개 깨어 행동 쥐 neuronal 회로의 생체 optogenetic 연구의 장기.
Protocol
Discussion
Optogenetics 특정 neuronal 하위 유형 통해 전례없는 제어를 할 수있는 강력하고 새로운 기술입니다. 전극을 통해 셀 타입 무차별 및 전기 자극의 침해 효과를 피하는 동안이는 해부학과 측두엽 정밀도와 신경 회로를 조절하기 위해 악용 할 수 있습니다. 섬유 광학의 주입은 조직에 최소한의 손상과 쥐 행동, 깨어에서 여러 세션을 통해 신경 회로의 일관성, 만성 자극 할 수 있습니다. 이 시스템은 원래 …
Acknowledgements
이 기술은 원래 스파르타 외., 2012 년까지 설명한 쉽게 우리가 실험실에서 사용하기 위해 적응 된 것을 인정하고 싶다.
Materials
| Name of the Reagent or Equipment | Company | Catalogue # | Comments |
| LC Ferrule Sleeve | Precision Fiber Products (PFP) | SM-CS125S | 1.25 mm ID |
| FC MM Pre-Assembled Connector | PFP | MM-CON2004-2300 | 230 μm Ferrule |
| Miller FOPD-LC Disc | PFP | M1-80754 | For LC ferrules |
| Furcation tubing | PFP | FF9-250 | 900 μm o.d., 250 μm i.d. |
| MM LC Stick Ferrule 1.25 mm | PFP | MM-FER2007C-1270 | 127 μm ID Bore |
| MM LC Stick Ferrule 1.25 mm | PFP | MM-FER2007C-2300 | 230 μm ID Bore |
| Heat-curable epoxy, hardener and resin | PFP | ET-353ND-16OZ | |
| FC/PC and SC/PC Connector Polishing Disk | ThorLabs | D50-FC | For FC ferrules |
| Digital optical power and Energy Meter | ThorLabs | PM100D | Spectrophotometer |
| Polishing Pad | ThorLabs | NRS913 | 9″ x 13″ 50 Durometer |
| Aluminum oxide Lapping (Polishing) Sheets: 0.3, 1, 3, 5 μm grits | ThorLabs | LFG03P, LFG1P, LFG3P, LFG5P | |
| Standard Hard Cladding Multimode Fiber | ThorLabs | BFL37-200 | Low OH, 200 μm Core, 0.37 NA |
| Fiber Stripping Tool | ThorLabs | T10S13 | Clad/Coat: 200 μm / 300 μm |
| SILICA/SILICA Optical Fiber | Polymicro Technologies | FVP100110125 | High -OH, UV Enhanced, 0.22 NA |
| 1×1 Fiberoptic Rotary Joint | doric lenses | FRJ_FC-FC | |
| Mono Fiberoptic Patchcord | doric lenses | MFP_200/230/900-0.37_2m_FC-FC | |
| Heat shrink tubing, 1/8 inch | Allied Electronics | 689-0267 | |
| Heat gun | Allied Electronics | 972-6966 | 250 W; 750-800 °F |
| Cotton tipped applicators | Puritan Medical Products Company | 806-WC | |
| VetBond tissue adhesive | Fischer Scientific | 19-027136 | |
| Flash denture base acrylic | Yates Motloid | ColdPourPowder+Liq | |
| BONN Miniature Iris Scissors | Integra Miltex | 18-1392 | 3-1/2″(8.9cm), straight, 15 mm blades |
| Johns Hopkins Bulldog Clamp | Integra Miltex | 7-290 | 1-1/2″(3.8 cm), curved |
| MEGA-Torque Electric Lab Motor | Vector | EL-S | |
| Panther Burs-Ball #1 | Clarkson Laboratory | 77.1006 | |
| Violet Blue Laser System | CrystaLaser | CK473-050-O | Wavelength: 473 nm |
| Laser Power Supply | CrystaLaser | CL-2005 | |
| Dumont #2 Laminectomy Forceps | Fine Science Tools | 11223-20 | |
| Probe | Fine Science Tools | 10140-02 | |
| 5″Straight Hemostat | Excelta | 35-PH | |
| Vise with weighted base | Altex Electronics | PAN381 |
References
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- Liu, X. Optogenetic stimulation of a hippocampal engram activates fear memory recall. Nature. 484, 381-385 (2012).
