An<em> In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test> Test
Summary
Biz sunuyoruz<em> In vivo</em> Damar geçirgenliği test etmek için test. Bu tahlil, interstisiyel boşluklar içine difüzyonu bir boya ve daha sonraki görüntüleme intravenöz enjeksiyon dayanmaktadır.
Abstract
Bu yöntem, deney hayvan modeli olarak, farelerde Evans Blue intravenöz enjeksiyon esas alınmaktadır. Evans mavisi albümin bağlayan bir boyadır. Fizyolojik koşullarda endotel albümin geçirmez, yani Evans mavisi ciltli albümini kalıntıları kan damarları içinde sınırlı. Artmış vasküler permeabilite endotel hücreleri teşvik patolojik koşullarda kısmen onların yakın temas kaybetmek ve endotel albumin gibi küçük proteinlerin geçirgen hale gelir. Bu durum dokularda Evans Mavisi ekstravazasyonu sağlar. Sağlıklı bir endotelin komşu damarlı dokularda boya ekstravazasyonu önler. Artan geçirgenlik sahip organlar sağlam endotel ile organlara kıyasla önemli ölçüde artmıştır mavi rengi gösterecektir. Vasküler permeabilite seviyesi basit görselleştirme veya deneysel hayvan / doku karşı kontrol doku miligram başına dahil boya kantitatif ölçümü ile değerlendirilebilir. İki poweBu testin rful yönlerini sadeliği ve kantitatif özellikleri vardır. Evans mavisi formamid doku belirli bir miktarda bekletilmeleri ile ekstrakte edilebilir. Evans Blue absorbans maksimum 620 nm'de ve absorbans asgari 740 nm'de olduğunu. Evans Mavisi için bir standart eğri kullanılarak, optik yoğunluk ölçümleri doku başına miligram çekilen miligram boya haline dönüştürülebilir. İstatistiksel analiz vasküler geçirgenliği önemli farklılıkları değerlendirmek için kullanılmalıdır.
Introduction
Seçici geçirgen engellerin Oluşumu ve bakım uygun organ gelişimi ve performansı 1,2 için gereklidir. Endotel hücreleri hattı damar lümeni ve kan ve tüm organları interstisyel boşluk arasında seçici ulaşım esastır yarı geçirgen bir bariyer oluşturur. Yeterli bir geçirgenlik bariyer sıkı bir şekilde büyüme faktörleri, sitokinler ve diğer stres bağlantılı moleküllerin 3 tarafından kontrol edilmektedir sıkı hücre-hücre birleşme yoluyla korunur. Endotel hücre bariyerin bozulması artmış geçirgenlik ve vasküler sızmasına neden olabilir. Bu etkiler, çeşitli hastalık durumlarında görülür ve altı çizili olan moleküler sinyalizasyonun anlayış multidisipliner yöntemlerin 4,5 gerektirir edilir. Bu yazıda, bir fare modeli kullanılarak damar geçirgenliğini ölçmek için in vivo yöntemi bir tarif.
Ayrıca Miles test olarak bilinir tanımlamakta olduğumuz testi, iyi establ olduğunuin vivo vasküler permeabilite test yöntemi ished. Tahlil bazal fizyolojik koşullar altında, albümin endotel bariyer çapraz değil, gerçeğine dayanır. Evans Mavisi, albümin için yüksek afinitesi olan bir azo boyası, deneysel bir hayvan, kan dolaşımında enjekte edilir, ve fizyolojik koşullar altında, bu kan damarları içinde sınırlı olması beklenmektedir. Bir vasküler geçirgenlik uyarıcı eklendiği zaman, ya da topikal veya sistemik olarak, kan damarlarını albümin bağlı Evans mavisi da, böylece protein sızdırmaya başlar ve. Geçirgen damarlar vardır dokuların hızlı bir mavi renk elde edilir.
Fare yanal kuyruk damarı içinde boya başarılı bir şekilde enjeksiyon deney iyi sonuç için kritik önem taşır. Kuyruk ven enjeksiyon tekniği kapsamlı uygulama gerektirir ve deney başlamadan önce hakim olmalıdır.
Gemi geçirgenliği bir yaşına ve ağırlığına son derece bağlıdırolmuş bölgeler, çok farklı fare suşları karşılaştırırken bu fareler veya diğer deneklere aynı doğum tarihleri ve kilosuna yakın olması şarttır. Endotel bariyer geçirgenliğini etkileyen diğer faktörler, sıcaklık, nem gibi çevresel koşullar ve çok önemlisi, fare kullanımı stres. Deney sonucunu etkileyebilecek faktörlerin çokluğu nedeniyle bu deney en az üç kez ve istatistiksel analiz yapılır tekrarlanır olduğunu her zaman tavsiye edilir.
Bu tahlil, damar genetik olarak modifiye edilmiş farelerin geçirgenlik yanı sıra, farklı genetik geçmişe sahip fareler veya karşılaştırmak için kullanılabilir. Geçirgenlik modüle edilen gen fonksiyonu bağlı olarak, bir uyarıcı varlığında ya da yokluğunda bir biçimde tespit edilebilir. Bu tahlil, ayrıca damar geçirgenliğini farklı bileşiklerin etkisini test etmek için ya da kullanılabilmektedir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Damar geçirgenliği kan damarı durumu için kritik bir göstergesidir. Artan vasküler permeabilite diyabet, hipertansiyon ve otoimmün hastalıklar 6,7,8 dahil olmak üzere çeşitli sistemik hastalıklar, mevcut olduğu gösterilmiştir. Artan vasküler permeabilite kayma gerilmesi aracılık gösterilmiştir, vasküler endotelyal büyüme faktörü ve fibroblast büyüme faktörü, serotonin, histamin ve 9 bradikinin gibi yangı benzeri büyüme faktörleri. Su ve küçük moleküller ekstrava…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu çalışma Ulusal Sağlık Enstitüleri, R01CA142928 bir hibe ile desteklenmiştir.
Materials
| REAGENT | |||
| EVANS BLUE | SIGMA | E2129 | |
| FORMAMIDE | INVITROGEN | 15515-026 | |
| PBS | 0.2M Phosphate 1.5M NaCl pH 7.4 |
||
| EQUIPMENT | |||
| SPECTROPHOTOMETER | EPPENDORF | 952000006 | |
| MOUSE RESTRAINT DEVICE | HARVARD APPARATUS | 340012 | |
| SYRINGE | BD | 309659 | |
| NEEDLES | BD | 305106 | The gauge of the needle depends on the size of the animal. |
| BALANCE | DENVER INSTRUMENT | TP-64 |
References
- Beck, K. F., et al. Inducible NO synthase: role in cellular signaling. J. Exp. Biol. 202, 645-653 (1999).
- Bertglia, S., Giusti, A. Role of nitric oxide in capillary perfusion and oxygen delivery regulation during systemic hypoxia. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288, H525-H531 (2005).
- Miles, A. A., Miles, E. M. Vascular reactions to histamine, histamine-liberator and leutaxine in the skin of guinea pigs. J. Physiol. (London). 118, 228-257 (1952).
- Weis, S. M. Vascular permeability in cardiovascular disease and cancer. Curr. Opin. Hematol. 15, 243-249 (2008).
- Kumar, P., Shen, Q., Pivetii, C. D., Lee, E. S., We, M. H., Yuan, S. Y. Molecular mechanisms of endothelial hyperpermeability: implications in inflammation. Expert Rev. Mol. Med. 30, 11-19 (2009).
- Viazzi, F., et al. Vascular permeability, blood pressure, and organ damage in primary hypertension. Hypertens. Res. 31, 873-879 (2008).
- Scheppke, ., et al. Retinal vascular permeability suppression by topical application of a novel VEGFR2/Src kinase inhibitor in mice and rabbits. J. Clin. Invest. 118, 2337-2346 (2008).
- Blanchet, M. R., et al. Loss of CD34 Leads To Exacerbated Autoimmune Arthritis through Increased Vascular Permeability. J. Immunol. 184, 1292-1299 (2010).
- Dvorak, A. M. Mast cell-derived mediators of enhanced microvascular permeability, vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, histamine, and serotonin, cause leakage of macromolecules through a new endothelial cell permeability organelle, the vesiculo-vacuolar organelle. Chem. Immunol. Allergy. 85, 185-204 (2005).
- Le Guelte, A., Gavard, J. Role of endothelial cell-cell junctions in endothelial permeability. Methods Mol. Biol. 763, 265-279 (2011).
- Martins-Green, M., Petreaca, M., Yao, M. An assay system for in vitro detection of permeability in human “endothelium”. Methods Enzymol. 443, 137-153 (2008).
