على<em> في الجسم الحي</em> الفحص لفحص الدم نفاذية سفينة
Summary
نحن نقدم ل<em> في الجسم الحي</em> فحص الدم لاختبار نفاذية الأوعية. ويستند هذا الفحص على حقن في الوريد لصبغ التصور واللاحقة من التشتت في أماكن الخلالي.
Abstract
ويستند هذا الأسلوب على حقن الوريد الأزرق ايفانز في الفئران كما اختبار نموذج حيواني. ايفانز الأزرق هو صبغة التي تربط الزلال. في ظل ظروف الفسيولوجية البطانة غير منفذ لالزلال، لذلك ايفانز الأزرق بقايا الزلال محدد مقيد داخل الأوعية الدموية. في ظروف مرضية تعزز زيادة الخلايا البطانية نفاذية الأوعية الدموية تفقد جزئيا اتصالاتهم وثيقة والبطانة تصبح قابلة للاختراق للبروتينات صغيرة مثل الزلال. هذا الشرط يسمح لانصباب الأزرق ايفانز في الأنسجة. A البطانة صحية تمنع تسرب للصباغة في الأنسجة المجاورة أوعية دموية. سوف الأجهزة مع زيادة نفاذية تظهر تلوين الزرقاء زيادة كبيرة مقارنة مع أجهزة البطانة سليمة. ويمكن تقييم مستوى نفاذية الأوعية الدموية عن طريق التصور بسيطة أو عن طريق القياس الكمي للصباغة أدرجت في مليغرام من أنسجة حيوانات التجارب التحكم مقابل / الأنسجة. اثنين باورجوانب من هذا الاختبار rful هي بساطتها والخصائص الكمية. ويمكن استخراج ايفانز الأزرق الصبغة من الأنسجة احتضان كمية معينة من الأنسجة في الفورماميد. ايفانز أقصى امتصاص الأزرق هو 620 نانومتر في الدنيا والامتصاص هو في 740 نانومتر. باستخدام منحنى القياسية لايفانز الأزرق، يمكن تحويل القياسات الكثافة البصرية في صبغ مليغرام لكل مليغرام من القبض على الأنسجة. وينبغي استخدام التحليل الإحصائي لتقييم فروق ذات دلالة إحصائية في نفوذية الأوعية الدموية.
Introduction
تشكيل وصيانة الحواجز نفاذية انتقائية ضرورية لتطوير الجهاز السليم و1،2 الأداء. الخلايا البطانية المبطنة للتجويف الأوعية الدموية وتشكل حاجزا شبه منفذ التي لا غنى عنها في نقل الدم بين الانتقائية والفضاء الخلالي من جميع الأجهزة. يتم الاحتفاظ حاجز النفاذية الكافية من خلال تقاطعات خلية الى خلية الضيق الذي تخضع للرقابة الصارمة من قبل عوامل النمو، السيتوكينات والجزيئات الأخرى. 3 الإجهاد. يمكن تعطيل الجدار الخلية البطانية يؤدي إلى زيادة نفاذية الأوعية الدموية والتسرب. وينظر في هذه الآثار الحالات المرضية المختلفة وفهم الإشارات الجزيئية التسطير يتطلب أساليب متعددة التخصصات 4،5. في هذه المقالة، ونحن تصف طريقة في الجسم الحي لقياس نفاذية الأوعية باستخدام نموذج الفأر.
الفحص نحن تصف، المعروف أيضا باسم فحص مايلز، هو جيد أنشأناished طريقة لاختبار نفاذية الأوعية الدموية في الجسم الحي. ويستند الفحص على حقيقة أنه في ظل الظروف الفسيولوجية القاعدية، الزلال لا عبور حاجز غشائي. يتم حقن ايفانز الأزرق، وهي صبغة الآزو مع تقارب عالية لالزلال، في مجرى الدم لحيوانات التجارب، وتحت ظروف الفسيولوجية، ومن المتوقع أن تكون مقيدة داخل الأوعية الدموية. عند إضافة التحفيز نفاذية الأوعية الدموية، إما موضعيا أو جهازيا، والأوعية الدموية تبدأ في تسرب البروتين، وبالتالي، أيضا الأزرق ايفانز المنضم إلى الألبومين. وهذا يؤدي إلى تلون مزرق السريع للأنسجة التي لديها سفن نفاذية.
حقن صبغة الناجح لفي ذيل الماوس الوريد الوحشي هو أمر حاسم لنتيجة جيدة من التجربة. تقنية حقن الوريد ذيل يتطلب ممارسة واسعة ويجب أن يتقن قبل بدء التجربة.
نفاذية الأوعية تعتمد بشكل كبير على عمر ووزن علىIMAL، لذلك عند مقارنة سلالات الفئران مختلفة لا بد أن الفئران أو غيرها من المواضيع اختبار مقربة من تواريخ الميلاد متطابقة والوزن. العوامل الأخرى التي تؤثر على نفاذية حاجز غشائي هي الظروف البيئية مثل الرطوبة ودرجة الحرارة، والأهم من ذلك،. الضغط التعامل مع الماوس بسبب العديد من العوامل التي يمكن أن تؤثر على نتائج التجربة أنه من المستحسن دائما أن يتم تكرار التجربة ثلاث مرات على الأقل ويقوم التحليل الإحصائي.
ويمكن استخدام هذا الاختبار لمقارنة أو نفاذية الأوعية من الفئران التي تم تعديلها وراثيا، وكذلك الفئران مع خلفيات وراثية مختلفة. ويمكن تقييم النفاذية في وجود أو عدم وجود التحفيز، وهذا يتوقف على وظيفة الجين الذي هو التضمين. ويمكن أيضا أن تستخدم هذا الفحص أو لاختبار تأثير مركبات مختلفة على نفاذية الأوعية.
Protocol
Representative Results
Discussion
نفاذية الأوعية الدموية هو علامة حاسمة للحصول على مركز الأوعية الدموية. وقد تبين زيادة نفوذية الأوعية الدموية لتكون موجودة في العديد من الأمراض الجهازية، بما في ذلك مرض السكري وارتفاع ضغط الدم، وأمراض المناعة الذاتية 6،7،8. وقد تبين زيادة نفوذية الأوعية الدموية…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من خلال منحة من المعاهد القومية للصحة، R01CA142928.
Materials
| REAGENT | |||
| EVANS BLUE | SIGMA | E2129 | |
| FORMAMIDE | INVITROGEN | 15515-026 | |
| PBS | 0.2M Phosphate 1.5M NaCl pH 7.4 |
||
| EQUIPMENT | |||
| SPECTROPHOTOMETER | EPPENDORF | 952000006 | |
| MOUSE RESTRAINT DEVICE | HARVARD APPARATUS | 340012 | |
| SYRINGE | BD | 309659 | |
| NEEDLES | BD | 305106 | The gauge of the needle depends on the size of the animal. |
| BALANCE | DENVER INSTRUMENT | TP-64 |
References
- Beck, K. F., et al. Inducible NO synthase: role in cellular signaling. J. Exp. Biol. 202, 645-653 (1999).
- Bertglia, S., Giusti, A. Role of nitric oxide in capillary perfusion and oxygen delivery regulation during systemic hypoxia. Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 288, H525-H531 (2005).
- Miles, A. A., Miles, E. M. Vascular reactions to histamine, histamine-liberator and leutaxine in the skin of guinea pigs. J. Physiol. (London). 118, 228-257 (1952).
- Weis, S. M. Vascular permeability in cardiovascular disease and cancer. Curr. Opin. Hematol. 15, 243-249 (2008).
- Kumar, P., Shen, Q., Pivetii, C. D., Lee, E. S., We, M. H., Yuan, S. Y. Molecular mechanisms of endothelial hyperpermeability: implications in inflammation. Expert Rev. Mol. Med. 30, 11-19 (2009).
- Viazzi, F., et al. Vascular permeability, blood pressure, and organ damage in primary hypertension. Hypertens. Res. 31, 873-879 (2008).
- Scheppke, ., et al. Retinal vascular permeability suppression by topical application of a novel VEGFR2/Src kinase inhibitor in mice and rabbits. J. Clin. Invest. 118, 2337-2346 (2008).
- Blanchet, M. R., et al. Loss of CD34 Leads To Exacerbated Autoimmune Arthritis through Increased Vascular Permeability. J. Immunol. 184, 1292-1299 (2010).
- Dvorak, A. M. Mast cell-derived mediators of enhanced microvascular permeability, vascular permeability factor/vascular endothelial growth factor, histamine, and serotonin, cause leakage of macromolecules through a new endothelial cell permeability organelle, the vesiculo-vacuolar organelle. Chem. Immunol. Allergy. 85, 185-204 (2005).
- Le Guelte, A., Gavard, J. Role of endothelial cell-cell junctions in endothelial permeability. Methods Mol. Biol. 763, 265-279 (2011).
- Martins-Green, M., Petreaca, M., Yao, M. An assay system for in vitro detection of permeability in human “endothelium”. Methods Enzymol. 443, 137-153 (2008).
