Summary
Наиболее часто используемый способ генерирования большого количества аутологичных дендритных клеток (DC) для использования в иммунотерапии опухолей описано. Метод использует IL-4 и GM-CSF дифференцировать ДК из моноцитов. Незрелые ДК стимулируются, чтобы созреть и затем загружается с антигенами, прежде чем они вводятся обратно в организм пациента.
Abstract
Хотя клинические исследования установили, что антиген-DC загруженных вакцины безопасны и перспективным для терапии опухолей 1, их клиническая эффективность еще предстоит установить. Метод, описанный ниже, подготовленной в соответствии с правилами процесса производства (GMP) руководящие принципы, является оптимизацией самых распространенных бывших естественных условиях подготовки способ генерации большого количества контроллеров домена для клинических исследований 2.
Наши способе используют синтетический агонист TLR 3 Полиинозиновую-полицитидилова кислота-поли-L-лизин-карбоксиметилцеллюлоза (Поли-ICLC), чтобы стимулировать DC. В предыдущем исследовании было установлено, что Poly-ICLC является самым мощным стимулом отдельных созревание для человека РС по оценке регуляция CD83 и CD86, индукции интерлейкина-12 (IL-12), фактор некроза опухолей (ФНО), интерферон гамма-индуцированной белок 10 (IP-10), interleukmin 1 (IL-1), интерфероны типа I (IFN) и минимальное интерлейкин-10 (IL-10) производства. ДК отличаются от замороженных мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС), полученного лейкаферез. РВМС выделяли центрифугированием в градиенте Ficoll и замораживают в аликвотах. В день 1 РВМС оттаивали, засевали на колбах культуры тканей, чтобы выбрать для моноцитов которые прилипают к пластиковой поверхности через 1-2 ч инкубации при 37 ° С в инкубаторе для тканевых культур. После инкубации лимфоцитов смываются и прилипшие моноциты культивировали в течение 5 дней в присутствии интерлейкина-4 (IL-4) и гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF) дифференцироваться в незрелые ДК. На 6-й день, незрелые ДК импульсно гемоцианин лимфы улитки (KLH) белок, который служит в качестве контроля качества вакцин и может повысить иммуногенность вакцины 3. ДК стимулируются, чтобы созреть, нагруженных пептидных антигенов, и инкубировали в течение ночи. На 7 день, клетки промывают и замораживают в аликвотах 1 мл, содержащих4 - 20 × 10 6 клеток с использованием контролируемой скорости морозильной камеры. Лот тестирования расцепителя для партий ДК выполняется, и должны соответствовать минимальным требованиям, прежде чем они вводят пациентам.
Protocol
1. Выделение и криоконсервации МНПК 4
- Асептически шип одного из портов доступа в лейкафереза сумку с помощью набора переноса плазмы. С помощью 60 мл шприц, передавать лейкафереза, полученных от пациентов в стерильный 500 мл.
- Регулировка громкости лейкафереза в 2 раза от первоначального объема использованием RPMI комнатной температуре. Тщательно перемешать.
- Аккуратно перемешайте бутылку Фиколл Paque-PLUS. Добавить 12 мл Ficoll-Пак Плюс в стерильные 50 мл коническую трубку.
- Осторожно слой 30 мл разбавленного продукта лейкаферез друг стерильные 50 мл конические пробирки, содержащей Ficoll. Будьте осторожны, чтобы не нарушить взаимодействие между Фиколл и клеточной суспензии.
- Повторите этапы 1.3 и 1.4, пока все лейкаферез не был слоистым.
- Центрифуга 50 мл конические пробирки при 1000 х г в течение 20 мин при комнатной температуре, без тормоза.
- Осторожно собрать облачный слой МНПК из каждой пробирки и TransfeR Чтобы новые стерильные 50 мл пробирки.
- Добавить RPMI в каждую пробирку до конечного объема 50 мл. Осторожно перемешать с помощью инверсии.
- Центрифуга клетки при 500 х г в течение 10 мин при 4 ° С с полного торможения.
- Удалить супернатант из каждой пробирки. Ресуспендируют клеточный осадок из каждой пробирки и добавляют RPMI до конечного объема 50 мл. Осторожно перемешать с помощью инверсии.
- Центрифуга клетки при 500 х г в течение 6 мин при 4 ° C.
- Удалить супернатант из каждой пробирки. Ресуспендируйте и бассейн вместе клеточные суспензии в одном 50 мл коническую трубку.
- Доведите объем объединенных PBMC, до 50 мл с более RPMI. Осторожно перемешать с помощью инверсии.
- Центрифуга клетки при 300 х г в течение 6 мин при 4 ° C.
- Удалить супернатант. Ресуспендируют осадок клеток в 50 мл среды RPMI. Осторожно перемешать, чтобы обеспечить равномерную суспензию клеток.
- Подсчет числа клеток и определения жизнеспособности клеток. Расчет общего количества жизнеспособных клеток.
- Центрифуга клетки при 300Х г в течение 6 мин при 4 ° C. Подготовьте замораживания средств массовой информации. Замораживание средств массовой информации состоит из 10% Диметилсульфоксид (ДМСО; Miltenyi Biotec) в человеческой сыворотки АВ (долины биомедицинских).
- Удалить супернатант. Ресуспендируют клеток в конечной концентрации 2 × 10 8 клеток / мл в холодном замораживания средств массовой информации.
- Сделать аликвоты по 1 мл в 1,8 мл криопробирки.
- Передача криопробирки в контролируемой скоростью морозильник и начать замораживание перспективе, программы 1. В конце прогона, передавать замороженных криопробирок сразу в паровой фазе жидкого азота морозильник.
2. День 0: Дифференциация дендритных клеток из моноцитов
- Добавить 30 мл RPMI / 1% аутологичной плазмы в стерильную 50 мл коническую трубку.
- Оттепель замороженных аликвотам МНПК нежным агитации в 37 ° С водяной бане. Когда полностью оттаять, передавать содержимое флаконов стерильных 50 мл коническую трубку. Тщательно перемешать.
- Центрифуга клетки в течение 6 минпри 500 х г при комнатной температуре. Удалить супернатант и ресуспендируют осажденные клетки в малом объеме среды RPMI / 1% аутологичной плазмы. Затем добавляют еще RPMI / 1% аутологичной плазмы до конечного объема 50 мл. Тщательно перемешать.
- Центрифуга клетки еще раз в течение 6 мин при 500 х г при комнатной температуре. Аспирируйте супернатант и ресуспендируют осадок в 50 мл RPMI / 1% аутологичной плазмы. Тщательно перемешать.
- Подсчет числа клеток и определения жизнеспособности клеток. Расчет общего количества жизнеспособных клеток.
- Пластина 1,40 × 10 8 клеток в 40 мл среды RPMI / 1% аутологичной плазмы на 225 см 2 EasyFlask. Повторяйте, пока все клетки не были покрыты.
- Инкубируйте EasyFlasks плоский на боку в течение 1 - 2 часов при 37 ° С в культуре ткани инкубаторе, содержащем 5% CO 2, чтобы позволить моноцитов прилипать к колбе.
- Когда инкубация завершена, удалите EasyFlask из инкубатора и мыть дважды, чтобы удалить не прилипшие клетки USIнг 30 мл предварительно нагретого RPMI.
- После второго мытья, добавляют 40 мл RPMI / 1% аутологичной плазмы с 400-1000 МЕ / мл IL-4 и 100-1000 МЕ / мл GM-CSF 5-8. Для этого протокола, мы используем 400 МЕ / мл IL-4 и 100 МЕ / мл GM-CSF.
- Инкубируйте EasyFlasks течение 2 дней при 37 ° С в культуре ткани инкубаторе, содержащем 5% СО 2.
3. День 2: Кормление дендритных клеток с IL-4 и GM-CSF
- Добавить 4 мл RPMI / 1% аутологичной плазмы с 400-1000 МЕ / мл IL-4 и 100-1000 МЕ / мл GM-CSF друг EasyFlask. Смешать, крутящихся и покачиваясь на его стороне.
- Выдержите EasyFlasks течение еще 3 дней (до 5 дней) при 37 ° C в культуре ткани инкубаторе, содержащем 5% CO 2.
4. День 5: сбор незрелые дендритные клетки
- Урожай культур, активно закрученного колб и с помощью пипетки вверх и вниз, чтобы ресуспендируйте неадгезивные и свободно присоединенными клетками. ПеренеситеСобранные клетки к новым 50 мл конические пробирки.
- Центрифуга труб при 500 х г в течение 6 мин при комнатной температуре. Удалить супернатант и ресуспендируют осадок клеток в 50 мл среды RPMI / 1% аутологичной плазмы. Тщательно перемешать.
- Подсчет числа клеток и определения жизнеспособности клеток. Расчет общего количества жизнеспособных клеток.
- Центрифуга труб при 500 х г в течение 6 мин при комнатной температуре. Пластина 1-2 × 10 6 клеток на лунку в 3 мл среды RPMI / 1% аутологичной плазмы с 400 МЕ / мл IL-4 и 100 МЕ / мл GM-CSF в 6-луночных планшетах для культуры ткани.
- Инкубируют планшеты при 37 ° С в культуре ткани инкубаторе, содержащем 5% СО 2 в течение ночи.
5. День 6: Созревание и загрузка антигена дендритных клеток
- Добавить 10 мкг / мл KLH до 1/3 от скважины в 6-луночные культуральные планшеты. Swirl пластины перемешать. KLH только добавляют к 1/3 от скважины, потому что KLH используется только для первой вакцины постоянного тока. Последующие DC вакцин ConTAIN только опухолевые пептиды антигена.
- ДК можно стимулировать, чтобы созреть, используя различные раздражители. Наиболее распространенными созревание раздражители, которые были использованы в клинических исследованиях была смесью цитокинов (IL-1 β, ФНО и ИЛ-6) и простагландин Е2 (PGE 2) 9,10. В последнее время использование Toll-подобных рецепторов (TLR) агонисты завоевали популярность 11,12. В этом протоколе, добавить 2 мг / мл Полиинозиновую-полицитидиловая Кислота-поли-L-лизин карбоксиметилцеллюлоза (Poly-МКПЦН) в лунки и хорошо перемешать. Поли-ICLC является клинической класса формулировки поли-IC, который стабилизирован с поли-L-*-лизин и карбоксиметилцеллюлозы (производства Oncovir, Inc.)
- Добавить 100 мкг / мл длинных пептидных антигенов (NY-ESO-1 и / или Melan-A/MART-1) к их назначенным скважин каждую лунку получавших только один пептид, чтобы избежать перекрестного конкуренции 13.
- Инкубируют планшеты при 37 ° С в культуре ткани инкубаторе, содержащем 5% CO <суб> 2 O / N.
6. День 7: Криоконсервация дендритных клеток
- Подготовка DC Замораживание Решение с помощью аутологичной плазмы и 10% ДМСО. Центрифуга решение DC Замораживание при 2000 х г в течение 20 мин при 4 ° С для удаления любых частиц. Передача супернатант в новую помечены 15 мл коническую трубку. Хранить при 4 ° С до использования.
- При инкубации в течение ночи закончена, урожай и бассейн все лунки, содержащие ДК импульсно с пептидами в 50 мл конические пробирки.
- Центрифуга труб при 500 х г в течение 6 мин. Удалите супернатант. Ресуспендируют осадок клеток в 5 мл среды RPMI / 1% аутологичной плазмы. Довести общий объем до 50 мл RPMI / 1% аутологичной плазмы. Тщательно перемешать.
- Подсчет числа клеток и определения жизнеспособности клеток. Рассчитать общее число жизнеспособных клеток.
- Центрифуга труб при 500 х г в течение 6 мин при комнатной температуре. Удалите супернатант и ресуспендируйте каждая гранула в 5 мл SteriLe 0,9% NaCl, USP и перехода на новые 15 мл конические пробирки. Принести каждой клеточной суспензии в 14 мл стерильной более 0,9% NaCl, USP. Cap и перемешать инверсии.
- Повторите предыдущий шаг дважды. После последнего центрифугирования, удаления надосадочной жидкости, получение как можно ближе к клетке гранулы, не нарушая гранул.
- Ресуспендируют клеточный осадок в DC Замораживание решения на 4 - 20 × 10 6 клеток / мл и аликвоты 1 мл на каждый криоскопической пробирки 1,8 мл флаконе.
- С помощью контролируемой скоростью морозильной камеры, одна программа, заморозить вниз аликвоты вакцины постоянного тока и передавать непосредственно в паровой фазе жидкого азота морозильник для длительного хранения.
7. Тестирование Лот релиз
- Каждую партию вакцины постоянного тока должны быть оценены и соответствуют конкретной партии выпуска критериев (табл. 1) до его выпуска для инъекции в пациента в исследование, обычно от 5 до 6 недель после вакцинного препарата.
- Жизнеспособность:Оценка жизнеспособности вакцина постоянного тока с использованием автоматического счетчика клеток. Минимальная приемлемая спецификации жизнеспособность> 70%.
- Идентичность: Оценка идентичность зрелых ДК (CD11c + CD14 + CD83 +) методом проточной цитометрии. Процент клеток CD11c + должна быть> 50%. Процент CD11c + и CD14 +-клеток должно быть <30%, а процент CD11c +, CD14 + и CD83 + клеток должна быть> 50%.
- Стерильность: Тест вакцины постоянного тока на наличие аэробных и анаэробных бактерий и грибков прямым культуры и окрашивание по Граму. Оценка на наличие микоплазм с использованием прямого система культуры и ДНК флуорохромом Assay Окрашивание индикатора клеточной линии. В этих тестах минимальный набор спецификаций в том, что никакого роста не наблюдалось от всех культур.
- Эндотоксина: Оценка содержания эндотоксина с помощью кинетического-QCL кинетической хромогенные LAL анализа и оно должно быть <50 КОЕ / мл для удовлетворения минимальных критериев.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
В период с 10 - 20% исходного РВМС дифференцироваться в ДК в конце периода культивирования. Зрелые ДК являются CD11c +, CD14 +, CD83 +, CD40 + и CCR7 + (рис. 1). Они выражают высокие уровни MHC класса I и II молекул и молекул костимулирующую CD80 и CD86. Поли-ICLC также индуцирует более низкие уровни PDL-1 по сравнению с другими агонистами TLR 14. Кроме того, эти поли-IC-созрел ДК выделяют большое количество IL-12 (рис. 2 и 15,16) и вызывают пролиферацию аллогенных Т-клеток (рис. 3).
Рисунок 1. Представитель фенотип полностью дифференцированных ДК повзрослела вместе с Поли-IC. Все ДК закрытого на передней и бокового точечный график. ДК были определеныс CD11c + и CD14-. Созревание ДК в ответ на Poly-МКПЦН (жирная линия) оценивали на основании выражения CD83, CD40 и CCR7 и по сравнению с нестимулированных РС (серый оттенок). Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок .
Рисунок 2. ДК повзрослела вместе с Поли-IC продуцируют высокие уровни цитокинов. Супернатанты от ДК отличать от 3 здоровых доноров были собраны после ночного созревания ДК поли-IC. Цитокины, вырабатываемые были измерены с помощью цитокинов бисера Array (ЦБА) человека воспалительные цитокины Kit (BD Biosciences), который измеряет IL-12p70, TNF, IL-10, IL-6, IL-1β и ИЛ-8.
RC = "/ files/ftp_upload/50085/50085fig3.jpg" />
Рисунок 3. ДК повзрослела вместе с Поли-ICLC вызывают пролиферацию аллогенных Т-клеток. Поли-ICLC созревших ДК здоровых доноров инкубировали 1:10 карбоксифлуоресцеин Диацетат сукцинимидилового эфира (CFSE) меченных аллогенных Т-клеток. Через 6 дней пролиферации () оценивали с помощью проточной цитометрии по стробирования на CD3 + Т-клеточной популяции. X-ось показывает разбавление CFSE, как измерение пролиферации, в различных совместного культивирования условиях: Т-клетки один, стимулированных постоянного тока, поли-ICLC стимулировали постоянного тока и фитогемагглютинин (PHA), стимулированных Т-клеток. Секрецию цитокинов (B) во время пролиферации оценивали из супернатантов культур в использовании BD CBA человека Th1/Th2 цитокинов Kit II (BD Biosciences), который измеряет IFN-, TNF, IL-10, IL-6, IL-4 и ИЛ-2. Только IFN, показана как другие цитокины не были обнаружены в измеряемых уровней в анализе./ / Www.jove.com/files/ftp_upload/50085/50085fig3large.jpg "целевых =" _blank "> Нажмите здесь, чтобы увеличить рисунок.
| Тест | Метод | Критерии |
| Жизнеспособность | Гуава анализ личности с сотового ViaCount Реагент | > 70% |
| Идентичность | Проточной цитометрии -% CD11c + клеток | > 50% |
| Проточной цитометрии -% CD11c + CD14 + клеток | <30% | |
| Проточной цитометрии -% CD11c + CD14-CD83 + клеток | > 50% | |
| Стерильность | Бактериальных и грибковых культур | Негативный |
| Mycoplasma: Прямая клеточной культуры | Негативный | |
| Эндотоксин | Кинетическая Хромогенные LAL анализа | <50 КОЕ / мл |
| Функция | Реакции смешанной культуры лимфоцитов | Результаты отчета |
Таблица 1. Критерии Лот выпуска.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Фазы I и II клинических испытаний, полученных из моноцитов ДК показали, что они индуцируют иммунный ответ у пациентов, однако клинический успех был ограничен 1. Частично это может быть связано с отсутствием консенсуса о том, как для формирования оптимального РСУ иммунотерапевтический использования. Хотя существуют многочисленные способы получения клинического класса ДК, эти методы различаются с точки зрения использования цитокинов используется для дифференциации моноцитов, стимула используется, чтобы вызвать созревание и способы антиген нагрузки. Формула для генерации оптимального ДК еще предстоит определить 2.
Последние лабораторные исследования показали, что ДК созрели с коктейлем провоспалительных цитокинов 10, который был использован в большинстве клинических испытаний, в частности наличие PGE2, может индуцировать дифференцировку регуляторных Т-клеток, так и Th2 ответа 17, экспресс IDO 18 и испытывают дефицит IL-12p70производство 19. Эти эффекты значительно подорвать способность вакцины вызывать иммунный ответ и, следовательно, поддерживают необходимость оценки альтернативных методов созревания домена в целях оптимизации их эффекты в естественных условиях.
Использование агонистов TLR, в частности агонисты TLR 3 Поли-IC, чтобы созреть ДК может улучшить клиническую эффективность DC. В пробирке исследования показали, что поли-IC-созрел ДК сохранили стабильную высокую экспрессию МНС молекул и CD83 и костимуляторных молекул CD40, CD80, CD86 и 14,15,20. Кроме того, поли-IC-созрели ДК производства высокие уровни IL-12, 14,16,20, важным цитокином для генерации противоопухолевого ответа 21, а также других провоспалительных цитокинов, таких как TNF-α, IL-6, IL-1β, IP-10, а я типа ИФНС 14. Более того, как было показано в мышиных моделях опухолей, ДК импульсно Вирус папилломы человека (ВПЧ) антигенов и созрел WПоли-й IC-загрунтовать цитотоксических Т-клеточные ответы были способны искоренения создана ВПЧ 16 опухолей, экспрессирующих 22. Как созревания статус ДК и присутствие IL-12 видимому, коррелируют с эффективностью в клинических испытаниях 23,24, использование поли-IC для зрелых ДК может быть важным шагом на пути к достижению цели клинического успеха.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы получили финансовую поддержку из следующих: NIH (AI061684, AI071078, AI044628 и K08 AI084578 (Miller)), Фонд Билла и Мелинды Гейтс, Дорис Дьюк благотворительный фонд, НИИ онкологии, Альянс за Волчанка исследований, и Изумрудное Foundation. Нина Bhardwaj является coinventor на патенты, связанные с подготовкой и использованием дендритных клеток манипулировать иммунитет. Авторы не имеют никакие другие соответствующие принадлежности или финансовое участие с любой организацией или организацией в финансовой заинтересованности в финансовом или конфликт с предметом или материалы обсуждаются в рукописи, кроме тех, раскрыта.
Acknowledgments
Авторы хотели бы поблагодарить Андрес Салазар (Oncovir, Inc) за дар Poly-МКПЦН.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI-1640 medium with L-glutamine | BioWhittaker | 12-702F | |
| 1M HEPES buffered saline | BioWhittaker | 17-737E | |
| Phosphate buffered saline (PBS) | BioWhittaker | 17-516F | |
| Human albumin, 25% solution USP | Aventis Behring | ||
| Ficoll-Hypaque PREMIUM | GE Healthcare | 17-5442-03 | |
| Human AB serum | Valley Biomedical | HP1022 | |
| Sterile saline USP | Hospira | ||
| CryoMACS DMSO | Miltenyi Biotec | 170-076-303 | |
| Leukine GM-CSF, 0.5 mg/ml | Berlex | A02266 | |
| MACS GMP IL-4 | Miltenyi Biotec | 170-076-101 | |
| Hiltonol, Poly-ICLC, 2 mg/ml | Oncovir | NA | |
| VACMUNE KLH | Biosyn | ||
| 225 sq cm EasyFlasks | Nalgene Nunc | 159934 | |
| Falcon 6-well tissue culture plates | Becton Dickinson | 353046 | |
| 1.8 ml CryoTube vials | Nalgene Nunc | 377267 | |
| Controlled Rate Freezer | Thermo | CryoMed |
References
- Lesterhuis, W. J., et al. Dendritic cell vaccines in melanoma: from promise to proof. Crit. Rev. Oncol. Hematol. 66, 118-134 (2008).
- Sabado, R. L., Bhardwaj, N. Directing dendritic cell immunotherapy towards successful cancer treatment. Immunotherapy. 2, 37-56 (2010).
- Schumacher, K. Keyhole limpet hemocyanin (KLH) conjugate vaccines as novel therapeutic tools in malignant disorders. J. Cancer. Res. Clin. Oncol. 127, Suppl 2. 1-2 (2001).
- Jaatinen, T., Laine, J. Isolation of mononuclear cells from human cord blood by Ficoll-Paque density gradient. Curr. Protoc. Stem Cell Biol. Chapter 2, Unit 2A 1 (2007).
- Eichler, H., et al. Multicenter study on in vitro characterization of dendritic cells. Cytotherapy. 10, 21-29 (2008).
- Feuerstein, B., et al. A method for the production of cryopreserved aliquots of antigen-preloaded, mature dendritic cells ready for clinical use. J. Immunol. Methods. 245, 15-29 (2000).
- O'Neill, D., Bhardwaj, N. Generation of autologous peptide- and protein-pulsed dendritic cells for patient-specific immunotherapy. Methods Mol. Med. 109, 97-112 (2005).
- de Vries, I. J., et al. Phenotypical and functional characterization of clinical grade dendritic cells. J. Immunother. 25, 429-438 (2002).
- Jonuleit, H., et al. Pro-inflammatory cytokines and prostaglandins induce maturation of potent immunostimulatory dendritic cells under fetal calf serum-free conditions. Eur. J. Immunol. 27, 3135-3142 (1997).
- Lee, A. W., et al. A clinical grade cocktail of cytokines and PGE2 results in uniform maturation of human monocyte-derived dendritic cells: implications for immunotherapy. Vaccine. 20, Suppl 4. A8-A22 (2002).
- Bhardwaj, N. Harnessing the immune system to treat cancer. J. Clin. Invest. 117, 1130-1136 (2007).
- Gnjatic, S., Sawhney, N. B., Bhardwaj, N. Toll-like receptor agonists: are they good adjuvants? Cancer J. 16, 382-391 (2010).
- Kedl, R. M., Kappler, J. W., Marrack, P. Epitope dominance, competition and T cell affinity maturation. Curr. Opin. Immunol. 15, 120-127 (2003).
- Bogunovic, D., et al. TLR4 engagement during TLR3-induced proinflammatory signaling in dendritic cells promotes IL-10-mediated suppression of antitumor immunity. Cancer Research. 71, 5467-5476 (2011).
- Verdijk, R. M., et al. Polyriboinosinic polyribocytidylic acid (poly(I:C)) induces stable maturation of functionally active human dendritic cells. J. Immunol. 163, 57-61 (1999).
- Rouas, R., et al. Poly(I:C) used for human dendritic cell maturation preserves their ability to secondarily secrete bioactive IL-12. Int. Immunol. 16, 767-773 (2004).
- Jongmans, W., Tiemessen, D. M., van Vlodrop, I. J., Mulders, P. F., Oosterwijk, E. Th1-polarizing capacity of clinical-grade dendritic cells is triggered by Ribomunyl but is compromised by PGE2: the importance of maturation cocktails. J. Immunother. 28, 480-487 (2005).
- Krause, P., et al. Prostaglandin E2 is a key factor for monocyte-derived dendritic cell maturation: enhanced T cell stimulatory capacity despite IDO. J. Leukoc. Biol. 82, 1106-1114 (2007).
- Morelli, A. E., Thomson, A. W. Dendritic cells under the spell of prostaglandins. Trends Immunol. 24, 108-111 (2003).
- Adams, M., et al. Dendritic cell (DC) based therapy for cervical cancer: use of DC pulsed with tumour lysate and matured with a novel synthetic clinically non-toxic double stranded RNA analogue poly [I]:poly [C(12)U] (Ampligen R). Vaccine. 21 (12), 787-790 (2003).
- Colombo, M. P., Trinchieri, G. Interleukin-12 in anti-tumor immunity and immunotherapy. Cytokine Growth Factor Rev. 13, 155-168 (2002).
- Mayordomo, J. I., et al. Bone marrow-derived dendritic cells pulsed with synthetic tumour peptides elicit protective and therapeutic antitumour immunity. Nat Med. 1, 1297-1302 (1995).
- Dhodapkar, M. V., et al. Rapid generation of broad T-cell immunity in humans after a single injection of mature dendritic cells. J. Clin. Invest. 104, 173-180 (1999).
- Schuler-Thurner, B., et al. Rapid induction of tumor-specific type 1 T helper cells in metastatic melanoma patients by vaccination with mature, cryopreserved, peptide-loaded monocyte-derived dendritic cells. J. Exp. Med. 195, 1279-1288 (2002).
