Bu çalışmada, yetişkin sıçan kalp miyositler izole ve kültürü tipik bir şekilde tanımladı. Kollajenaz ve proteaz tek miyositler sindirimi ve izole etmek için kullanılır. Miyositler Çoğu deney gereksinimlerini karşılamak bu protokolü takip kültürü.
Abstract
Kültüre birincil yetişkin kemirgen kalp hücrelerinin Kardiyovasküler araştırmalar için önemli bir model sistem. Bununla birlikte, sağlam, işlevsel kültür yetişkin miyositler kurulması birçok araştırmacı için, hız sınırlayıcı teknik açıdan zor bir adım olabilir. Burada, birkaç gün süreyle kültür canlı kalır yetişkin sıçan kalp miyositler yüksek verim elde etmek için bir protokol nitelendirdi. Kalp düşük Ca altında izole ve kollajenaz ve proteaz ile perfüze<sup> 2 +</sup> Koşulları tek miyositler kurtarmak için. Ca<sup> 2 +</sup> Dayanıklı hücrelerin ekstrasellüler Ca kademeli artışlar elde edilir<sup> 2 +</sup> Takip eden üç yıkama adımları konsantrasyon. Hücreler, süzülmüş, kültür ortamı yeniden süspanse ve laminin kaplı bordroları kaplama vardır. Bu protokol kullanılarak elde Kültüre miyositler dört gün için geçerli değildir ve elektrofizyoloji, biyokimya, görüntüleme ve moleküler biyoloji de dahil olmak üzere pek çok deneyler için uygundur.
Protocol
Bölüm I. Hazırlık cerrahi için Rat cerrahi bir gün önce, tüm çözümler yapılır emin olun, ancak henüz herhangi bir enzimler katmayan. Tamponlar A, B ve yıkama tamponu depolama önce sterilite için filtre olmalıdır. Tamponlar 4 ° C'de muhafaza edilmelidir 6-iyi doku kültürü plakaları 10-20 mg / ml 2 ml 1XSFM laminin de önceki gün kaplanmış olmalıdır ve 37 ° C CO 2 kuvöz içinde saklanmalıdır. Ameliyatın yapıldığı gün,% 70 etanol ile kelep…
Discussion
Kritik bir adım, izole kalp perfüzyon sistemi üzerinde asılı olduğu hızı. Enzimatik sindirim sürenin uzunluğu, her bir sıçan için biraz farklı olabilir. Ayarı, kalp, sindirim düzenli bir süre sonra ne kadar yumuşak olur bağlıdır. Enzim sindirimi yavaş Ca 2 +-hoşgörülü sağlıklı hücreleri elde etmek için gerekli Ca 2 + sonra kurtarma.
Hiyalüronidaz Proteaz XIV yerine kullanılır hariç kobay için, protokol ile aynıdır. Tipik olarak, onl…