성인 쥐 심장 Myocytes의 차 문화

Summary

본 논문에서 우리는 성인 쥐 심장 myocytes를 분리하고 문화에 전형 방법을 설명했다. Collagenase와 단백 분해 효소는 단일 myocytes을 소화하고 격리하는 데 사용됩니다. Myocytes는 대부분의 실험 요구 사항을 충족이 프로토콜을 따라 교양.

Abstract

교양 차 성인 쥐 심장 세포는 심장 혈관 연구에 중요한 모델 시스템입니다. 그럼에도 불구하고, 강력하고 실용적 교양 성인 myocytes의 설립은 많은 연구자에 대한 기술적 도전, 속도 – 제한 단계하실 수 있습니다. 여기 며칠 동안 문화에 가능한 남아 성인 쥐 심장 myocytes 높은 수율을 얻을 수있는 프로토콜을 설명했다. 마음은 낮은 칼슘 아래의 고립과 collagenase와 프로 테아제와 perfused입니다^{2 +} 조건은 단일 myocytes를 복구할 수 있습니다. CA^{2 +} – 관용 세포는 세포외 칼슘의 stepwise 증가를 얻을 수있다<sup> 2 +</sup세 이후 세척 단계에> 집중. 세포는 필터링된 문화 매체 resuspended 및 laminin 코팅 전표에 도금입니다. 이 프로토콜을 사용하여 얻은 교양 myocytes은 최대 4 일 동안 실용적이며, 전기 생리학, 생화학, 이미징 및 분자 생물학을 포함하여 대부분의 실험에 적합합니다.

Protocol

수술 부 I. 준비 쥐의 수술 전날, 모든 솔루션 만들어진 특정하게하지만, 아직 효소를 추가하지 마십시오. 버퍼 A, B 및 세척 버퍼는 모든 저장하기 전에 불임에 대한 필터링해야합니다. 버퍼는 모든 4 ° C.에 보관해야 6 – 잘 조직 문화 플레이트는 10-20 μg / 2 ML ML 1XSFM에서 laminin뿐만 아니라 전날과 도금해야합니다, 37 CO 2 배양기에서 ° C에서 저장해야합니다. 수술 당일,…

Discussion

중요한 단계는 고립된 마음이 재관류 시스템에 걸려있는 속도입니다. 효소 소화 기간의 길이는 각 쥐에 대해 약간 다를 수 있습니다. 조정은 마음이 소화의 일반 기간이 지난 후된다 얼마나 부드러 운지에 따라 달라집니다. 천천히 소화 효소가 ⁺ – 관용 건강한 세포 ^{칼슘이를위한} 필수 ⁺ 후 칼슘 ² 복구.

hyaluronidase는 단백 분해 효소 XIV 대신 사?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
NaCl		Sigma	S6191
KCl		Sigma	P9541
HEPES		Sigma	H4034
K2HPO4		Sigma	P9666
MgSO4		Fluka	63068
Glucose		Sigma	G7021
CaCl2		Sigma	C7902
Heparin Sodium Salt		Sigma	H4784
Collagenase Type II		Worthington Biochemical	LS004176
Protease XIV		Sigma	P5147
2,3-Butanedione Monoxime (BDM)		Sigma	B0753
Carnitine		Sigma	C9500
Taurine		Sigma	T0625
Glutamic Acid		Sigma	G1501
BSA		Sigma	A3294
Creatine		Sigma	C3630
Antibiotic		Cellgro	30-009-CI
Media 199		GIBCO	11150
FBS		Hyclone	SH30071.03
Laminin		BD Bioscience	354232
water bath		Fisher Scientific	15-462-5
variable flow chemical pump		Fisher Scientific	15-077-67
6-well culture plate		Corning	3516