Sectionnement des préparations minces tranches d'immunohistochimie
Summary
Le présent procédé permet cryostat reproductibles sectionnement de petits morceaux de tissu, difficile à gérer, comme les biopsies et les tranches de cerveau. Nous utilisons une étape de congélation en aluminium simple pour faciliter la manipulation des tissus et un cryostat standard pour produire en routine des sections 50 à 10 microns de série à partir de 400 microns tranches épaisses du cerveau.
Abstract
De nombreuses enquêtes en neurosciences, ainsi que d'autres disciplines, visent à étudier les petits, mais des morceaux macroscopiques ou des morceaux de tissu qui ont été préservés, fraîchement prélevées, ou excisée mais a gardé viables, comme dans les préparations tranche de tissu cérébral. Après des études au microscope de ce matériau peut être difficile, car les échantillons de tissus peuvent être difficiles à manipuler. Démontrée ici est une méthode pour obtenir des coupes de tissu mince avec une épaisseur qui peut aller de 0,2 à 5.0 mm. Nous avons régulièrement coupé 400 microns d'épaisseur des tranches de cerveau Vibratome série en sections 50-10 microns cryostat coronale. Les tranches sont généralement d'abord utilisé pour des expériences d'électrophysiologie et nécessitent une analyse microscopique de la cytoarchitecture de la région à partir de laquelle les enregistrements ont été observées. Nous avons construit un dispositif simple qui permet de préparer contrôlées et reproductibles et le positionnement de la tranche de tissu. Ce dispositif est constitué d'un cylindre 5 cm de longueur avec un diamètre de 1,2 cm, qui sert comme une étape de congélation pour la tranche. Un anneau glisse parfaitement sur les parois du cylindre fournissant environ la tranche permettant au tissu d'être immergé dans le composé de congélation (par exemple, OCT). Il est ensuite rapidement congelé à la glace sèche écrasée et la plaquette en résulte peut être facilement de position pour la coupe cryostat. Les lames minces peuvent être montés sur des dégel des lames recouvertes de permettre à d'autres études à réaliser, telles que des méthodes de coloration différents, l'hybridation in situ, ou l'immunohistochimie, comme démontré ici.
Protocol
Discussion
Le protocole présenté ici fournit aux chercheurs une présentation concise, facile à suivre aperçu de la façon d'obtenir des coupes cryostat mince de petits morceaux de tissu, difficile à gérer, comme les biopsies et les tranches de cerveau pour poursuivre des études à réaliser, tels que différentes méthodes de coloration, l'hybridation in situ, ou immunohistochimie.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| O. C. T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Glycerol Solution | 30% Glycerol Solution in PBS w/v | |||
| Sucrose Solution | 30% Sucrose Solution in PBS w/v |
Referências
- Scoutern, C. W., O’Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).
- Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).
