Sezionamento sottile fetta di preparativi per immunoistochimica
Summary
Il metodo attuale consente criostato riproducibile sezionamento di piccole dimensioni, difficili da gestire, pezzi di tessuto, come ad esempio biopsie e fette di cervello. Utilizziamo una semplice fase di congelamento in alluminio da facilitare la manipolazione di tessuti e un criostato standard per produrre regolarmente sezioni 5-10 micron di serie da 400 sezioni di cervello micron di spessore.
Abstract
Molte indagini nel campo delle neuroscienze, così come altre discipline, coinvolgono lo studio piccolo, ma pezzi macroscopici o sezioni di tessuto che sono stati conservati, appena rimossa, o espunto ma mantenuto vitale, come in preparazioni fetta del tessuto cerebrale. Successivi studi microscopici di questo materiale può essere impegnativo, come i campioni di tessuto può essere difficile da gestire. Dimostrato qui è un metodo per ottenere sezioni congelate di tessuto sottile con uno spessore che può variare 0,2-5,0 mm. Siamo regolarmente tagliato 400 micron di spessore fette di cervello Vibratome serialmente in 5-10 sezioni congelate micron coronale. Le fette sono tipicamente utilizzato per un primo esperimento di elettrofisiologia e quindi richiedere l'analisi microscopica dei citoarchitettura della regione da cui sono state osservate le registrazioni. Abbiamo costruito un semplice dispositivo che permette la preparazione controllato e riproducibile e il posizionamento della fetta del tessuto. Questo dispositivo è costituito da un cilindro di 5 cm di lunghezza con un diametro di 1,2 cm, che funge da palcoscenico congelamento della porzione. Un anello scivola perfettamente sulle pareti del cilindro che fornisce in tutto il fetta permettendo al tessuto di essere immersi in mescola congelamento (ad esempio, OCT). Questa è poi rapidamente congelato con ghiaccio tritato secco e il wafer risultante può essere posizione facilmente per sezionamento criostato. Sezioni sottili possono essere disgelo-montate su vetrini rivestiti per permettere ulteriori studi per essere eseguito, come vari metodi di colorazione, di ibridazione in situ, o immunoistochimica, come illustrato di seguito.
Protocol
Discussion
Il protocollo qui presentato fornisce ai ricercatori un conciso, facile da seguire di ingombro di come ottenere criostato sezioni sottili di piccole dimensioni, difficili da gestire, pezzi di tessuto, come ad esempio biopsie e fette di cervello per ulteriori studi da eseguire, come ad esempio vari metodi di colorazione, di ibridazione in situ, o immunoistochimica.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| O. C. T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Glycerol Solution | 30% Glycerol Solution in PBS w/v | |||
| Sucrose Solution | 30% Sucrose Solution in PBS w/v |
Referências
- Scoutern, C. W., O’Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).
- Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).
