Seccionamento fina de Preparações Slice para Imunohistoquímica
Summary
O presente método permite criostato reprodutíveis corte de pequenas peças, difíceis de gerenciar, de tecidos, tais como biópsias e fatias de cérebro. Nós utilizamos um estágio de congelamento simples de alumínio para facilitar a manipulação de tecido e um criostato padrão para produzir seções rotineiramente micron 10/05 de série a partir de 400 micron fatias de cérebro de espessura.
Abstract
Muitas investigações em neurociência, assim como outras disciplinas, envolvem o estudo pequeno, ainda peças macroscópicas ou secções do tecido que foram preservados, recém-retirado, ou cortado, mas manteve viável, como em preparações fatia de tecido cerebral. Subseqüentes estudos microscópicos deste material pode ser um desafio, como as amostras de tecido pode ser difícil de manusear. Demonstrado aqui é um método para a obtenção de seções criostato fina de tecido com uma espessura que pode variar 0,2-5,0 mm. Rotineiramente cortar 400 micron fatias de cérebro de espessura Vibratome série em 50-10 micron seções criostato coronal. As fatias são normalmente utilizados pela primeira vez para experimentos de eletrofisiologia e, em seguida, exigem uma análise microscópica da citoarquitetura da região a partir do qual as gravações foram observados. Construímos um dispositivo simples que permite a preparação controlada e reprodutível e posicionamento da fatia de tecido. Este dispositivo consiste de um cilindro de 5 cm de comprimento com um diâmetro de 1,2 cm, que serve como um estágio de congelamento da fatia. Um anel confortavelmente desliza sobre as paredes do cilindro em torno do fornecimento de fatia permitindo que o tecido a ser imerso em composto de congelamento (por exemplo, OCT). Este é, então, rapidamente congelados em gelo seco esmagado eo wafer resultante pode ser facilmente para a posição de corte do criostato. Seções finas podem ser descongelar montado em lâminas revestidas para permitir que novos estudos a serem realizados, como vários métodos de coloração, hibridização in situ, ou imuno-histoquímica, como demonstrado aqui.
Protocol
Discussion
O protocolo apresentado aqui fornece aos pesquisadores uma concisa, fácil de seguir esboço de como obter seções criostato fina de pequenas peças, difíceis de gerenciar, de tecidos, tais como biópsias e fatias de cérebro de novos estudos a serem realizados, tais como vários métodos de coloração, hibridização in situ, ou imuno-histoquímica.
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| O. C. T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Glycerol Solution | 30% Glycerol Solution in PBS w/v | |||
| Sucrose Solution | 30% Sucrose Solution in PBS w/v |
Referências
- Scoutern, C. W., O’Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).
- Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).
