Тонкие секционирования фрагмент Подготовка к Immunohistochemistry
Summary
Настоящий метод позволяет воспроизводимых криостат секционирования маленький, трудно в управлении, тканевой части, такие как биопсия и мозг ломтиками. Мы используем простой этап замораживания алюминия для облегчения обработки ткани и стандартных криостате в плановом порядке выпускать 5-10 микрон серийных срезов от 400 микрон ломтики мозга.
Abstract
Многие исследования в области неврологии, а также других дисциплин, связаны с изучением небольшой, но макроскопические части или участки тканей, которые сохранились, только что удален, или вырезали но сохранил жизнеспособным, как и в часть подготовки ткани головного мозга. Последующие микроскопические исследования этого материала может быть сложным, так как образцы тканей может быть трудно справиться. Продемонстрированный здесь метод получения тонких срезов тканей криостат с толщиной, которая может варьироваться от 0.2-5.0 мм. Мы регулярно вырезать 400 микрон ломтики мозга Vibratome серийно в 5-10 микрон корональные разделы криостата. Ломтиками, как правило, впервые использован для проведения экспериментов электрофизиологии, а затем требуют микроскопического анализа cytoarchitecture региона, из которого записи не наблюдалось. Мы построили простое устройство, которое позволяет контролировать и воспроизводимые подготовки и позиционирование ткани срез. Это устройство состоит из цилиндра 5 см в длину при диаметре 1,2 см, который служит замораживание почву для среза. Кольцо плотно скользит по цилиндр предоставления стены вокруг среза позволяет ткани, которая будет погружена в замораживании соединения (например, в октябре). Это потом быстро замороженные с дробленым сухой лед и в результате пластины можно легко позиции для криостата секционирования. Тонкие разделов могут быть оттепели монтажа на покрытие слайды, чтобы дальнейшие исследования должны быть выполнены, например, различные методы окрашивания, на месте гибридизация, или иммуногистохимии, как показано здесь.
Protocol
Discussion
Протокол, представленные здесь предоставляет исследователям краткой, простой в последующей схема того, как для получения тонких срезов криостат мелких, трудно в управлении, тканевой части, такие как биопсия и мозг ломтиками для дальнейших исследований должны быть выполнены, например, различные ?…
Materials
| Material Name | Tipo | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| O. C. T. | Ted Pella, Inc | 27050 | ||
| Glycerol Solution | 30% Glycerol Solution in PBS w/v | |||
| Sucrose Solution | 30% Sucrose Solution in PBS w/v |
Referências
- Scoutern, C. W., O’Connor, R., Cunningham, M. Perfusion fixation of research animals. Microsc. Today. 14, 26-33 (2006).
- Cunningham, M. G., Connor, C. M., Zhang, K., Benes, F. M. Diminished serotonergic innervation of adult medial prefrontal cortex after 6-OHDA lesions in the newborn rat. Brain Res. Dev. Brain Res. 157, 124-131 (2005).
