Summary
Este artículo describe la utilización de la ecografía de alta resolución en ratones modificados genéticamente el cáncer de páncreas. El objetivo principal es proporcionar una instrucción detallada para la detección y evaluación de los tumores pancreáticos endógenos.
Abstract
La LSL-KrasG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de ratón (KPC) representa un modelo transgénico establecido y utilizado para evaluar nuevas terapias en cáncer de páncreas. Tumor es variable en el modelo KPC entre 8 semanas y varios meses. Por lo tanto, herramientas de proyección de imagen no invasivas están obligados a pantalla de inicio de tumor y monitorear respuesta al tratamiento. Para solucionar este problema, diferentes enfoques han surgido en los últimos años. Ultrasonido de alta resolución tiene grandes ventajas como la no invasividad, tiempos de sesión rápido y una resolución de imagen de alta sin exposición a la radiación. Sin embargo, en los ratones no es trivial y suficiente conocimiento anatómico y habilidades prácticas se requieren para realizar con éxito la ecografía de alta resolución en modelos preclínicos de cáncer de páncreas. Con el siguiente artículo se presenta una guía práctica detallada para ultrasonido abdominal en modelos murinos con un enfoque particular en modelos de cáncer de páncreas endógeno. Además, se proporciona un resumen de errores comunes y cómo evitarlos.
Introduction
Modelos de ratón modificados genéticamente han adquirido una importancia creciente en la investigación del cáncer debido a su capacidad para recapitular muy de cerca la compleja naturaleza de la carcinogénesis humana1,2,3. Uno de los más frecuentemente utiliza modelos para estudiar el desarrollo de cáncer de páncreas, la progresión y la respuesta terapéutica se caracteriza por una mutación activadora en el oncogén Kras combinado con una inactivación del tumor supresor p534. Este LSL-KrasG12D / +; LSL-Trp53R172H / +; PDX-1-Cre modelo de ratón (KPC) imita la progresión paso a paso de lesiones pre-invasivas neoplasia intraepitelial pancreática (PanIN) a carcinoma invasor. Fenotípicamente, casi todos los ratones desarrollan PDAC dentro de los seis primeros meses después del nacimiento. Sin embargo, en comparación con modelos trasplantados, el modelo KPC revela un inicio tumor altamente variable de 8 semanas a varios meses4. Una vez que los tumores pancreáticos alcanzan un cierto tamaño (5-9 mm de diámetro), crecimiento tumoral acelera rápidamente y ratones tendrán que estar inscritos en ensayos preclínicos5. Por lo tanto, la detección exacta de la aparición del tumor y tamaño del tumor es una condición esencial para la logística de estudio preclínico y seguimiento farmacoterapéutico. En general, varios enfoques como la proyección de imagen de resonancia magnética (MRI)6,7,8,9 o ultrasonido de alta resolución de la exploración de la tomografía computada puede ser empleada para llevar a cabo la proyección del tumor y tratamiento10. Cada técnica tiene sus ventajas y desventajas. Aunque MRI- o la tomografía computada (CT)-proyección de imagen permite la adquisición de datos de alta resolución así como cálculo de volumen exacto, tiempo prolongado examen bajo sedación general y equipos muy costosos, se requiere y no permiten frecuentes exploración durante un largo período de tiempo. En contraste, pequeños animal ultrasonografía es un método establecido que se puede emplear para detectar patología abdominal en ratones11. Ventajas de este método de proyección de imagen son breves análisis de tiempos, alta resolución, y la posibilidad de utilizar el ultrasonido doppler o contraste realzado ultrasonido (CEUS) para visualizar la perfusión de órganos en paralelo. Sin embargo, conocimiento anatómico, 3D imaginación y formación práctica completa se requieren para la interpretación de la imagen correcta.
En el artículo siguiente, se proporciona un protocolo detallado para la utilización de ultrasonido de alta resolución en el modelo KPC. Además, imágenes de ultrasonido estándar son representados y etiquetados con estructuras del órgano para facilitar la orientación para el investigador.
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Protocol
Este protocolo está de acuerdo con las pautas de cuidado de los animales en la Universidad médica centro de Go! ttingen, Alemania (33,9-42502-04-15/2056). Dependiendo de los requerimientos específicos de cada animal revisar tableros, algunos de los pasos del protocolo podrían ser modificados en consecuencia.
1. abdominal palpación de KPC ratones
- Para evitar ecografías innecesarias, palpe el abdomen de ratón para identificar ratones que posiblemente podrían tener una lesión intraabdominal y que posteriormente deben realizarse una ecografía abdominal.
- Realizar palpación abdominal semanal a partir de 8 semanas de edad en el modelo de ratón KPC. Ultrasonido de alta resolución también puede aplicarse en modelos de tumores trasplantados (e.g., orthotopics) u otros modelos de ratón modificados genéticamente.
Nota: Dependiendo del tumor cinética y estudio objetivo (estudio sobre la prevención, estudio de intervención terapéutica), las detección de tumores muy pequeños (1-2 mm) es posible monitor tumor inicio antes de los tumores pueden ser palpated.
- Realizar palpación abdominal semanal a partir de 8 semanas de edad en el modelo de ratón KPC. Ultrasonido de alta resolución también puede aplicarse en modelos de tumores trasplantados (e.g., orthotopics) u otros modelos de ratón modificados genéticamente.
- Coloque el ratón sobre la rejilla de la jaula y suavemente el ratón por la cola y palpe el abdomen suavemente yendo arriba y abajo con el índice y el pulgar de la mano de no fijación (figura 1).
- Si el ratón tolera la palpación suave, vaya incrementando lentamente la presión. Una resistencia más grande se puede detectar fácilmente en el abdomen superior e inferior. A veces, las heces duras pueden interpretarse erróneamente como un tumor masa.
2. preparación del espacio de trabajo
- Proporcionar espacio para al menos tres unidades de trabajo: área de la exploración previa, análisis de etapa y recuperación de la jaula. El material solicitado se representan en la figura 2.
- Limpiar la placa de trabajo principal (por ejemplo con un 70% etanol) y la plataforma de calefacción antes de la exploración (figura 3). Asegúrese de que la temperatura de 38-40 ° C se alcanza antes de transferir el primer ratón.
- Encienda la máquina de ultrasonido y crear una nueva carpeta para los datos adquiridos (figura 4). La configuración de modo de B se aplica para la proyección de imagen abdominal. Además, asegurar que el transductor abdominal está enchufado en el puerto activo de la máquina. Fijar la cabeza del transductor en la parte superior de la etapa de trabajo utilizando el sistema de montaje de transductor.
- Preparar una jaula de recuperación en una placa calefactora o estera térmica (o lámpara de calefacción de uso) para termorregulación posterior al procedimiento y pronta recuperación de ratones escaneadas. Poner una capa delgada de tejido como amortiguador en la parte inferior de esta jaula para evitar la aspiración de la ropa de cama con el riesgo de asfixia (figura 5).
3. inhalación anestesia
- Siga poniendo un ratón en la cámara de inducción. Abrir la válvula para flujo de portador de gas (1 L/min de oxígeno o aire) y establecer la concentración de isoflurano al 4%, lo que permite una saturación lentamente creciente de la cámara de inducción. Asegúrese de que isoflurano adecuada compactación (filtro pasivo o activo) esté en lugar. Después de unos 2-4 min el ratón será generalmente bajo sedación profunda.
- Mantener sedación mediante la administración de isoflurano de 2% a través del cono de nariz en el escenario de trabajo.
- Cuidadosamente transfiera el animal de la cámara de inducción a la etapa de trabajo. Compruebe que el cono de nariz para un flujo de gas constante. Poner el hocico de ratón en el cono de nariz de la salida de línea de anestesia. La posición habitual para la exploración inicial es la posición supina. El ratón también puede colocarse sobre su lado derecho o izquierdo para mejorar la visibilidad de cabeza pancreática o tumores de la cola (figura 6).
- Aunque el ultrasonido abdominal no es dolorosa por sí, realizar la prueba del pellizco de pie como indicador de una condición libre de dolor y estado de profundidad anestésica. Si el ratón está todavía activo o moverse activamente, retransferencia al animal de nuevo en la cámara de inducción para la inducción repetida y prolongada.
- Use ungüento de protección ocular para prevenir lesiones corneales debido a la pérdida de líquidos.
- Durante la anestesia, use un sistema de monitoreo. Sin embargo, ECG y la temperatura rectal no usada normalmente para la exploración del ultrasonido abdominal. Lo importante, ratones pierden la capacidad de thermoregulate bajo anestesia. Por lo tanto, observar de cerca los signos clínicos de hipotermia o señal de socorro respiratoria tales como jadeo o apnea. Si cualquier síntoma es obvio parada isoflurano y coloque el ratón en la jaula de recuperación inmediatamente.
4. ultrasonido ajustes
- Encender el sistema de ultrasonidos según las instrucciones del fabricante. Asegúrese de que la configuración principal se pone en la proyección de imagen general con el paquete abdominal activado. B modo de imagen se utiliza generalmente para la adquisición de datos como un estándar.
- Lograr una calidad de imagen optimizada con los siguientes parámetros: frecuencia de 40 MHz, ganancia 2D 25-30 dB, profundidad 10 mm, ancho 10 mm, de la imagen de la imagen 3 zonas focales con centro entre 3-6 mm.
5. ratón preparación
- Fijar la extremidad superior e inferior con cinta adhesiva. Ser tan cuidadosos como sea posible para evitar cualquier lesión al animal debido a la fijación (figura 7).
- Eliminar toda piel abdominal usando cortauñas para mascotas electrónicas. Debido a la textura de la piel, iniciar desde la parte inferior del abdomen hasta el tórax. Cuidar la xiphoideus de processus para evitar lesiones en la piel en esta área.
Nota: Piel de ratón refleja ondas de ultrasonido y disminuye la visibilidad. - Utilizar crema depilatoria para realizar una preparación de la piel optimizado y el retiro completo de la piel. Administrar una fina capa de crema en el abdomen afeitado utilizando puntas de algodón (figura 8). Retirar la crema (después de 30 s o más adelante dependiendo de la crema utilizada) con tejidos secos seguidos de mucha agua para eliminar completamente los restos (figura 9, figura 10, figura 11). Crema remanente pueden causar irritaciones de la piel y mucosas después de la ecografía y así puedan afectar la salud.
- Para asegurar la exploración adecuada condiciones de gel de ultrasonido en el abdomen (figura 12). Gel ultrasonido caliente se utiliza generalmente, con el fin de minimizar la hipotermia para el ratón.
- Aplicar manualmente una capa fina de gel de ultrasonido en la cabeza de transductor. Realice una prueba tocando el extremo del transductor con la muesca. En la pantalla una señal en la parte superior izquierda se puede ver si el transductor se coloca correctamente.
6. abdominal ultrasonido
- Ajuste el transductor en el abdomen usando presión firme. Fuerte compresión del abdomen del ratón puede llevar a deterioro respiratorio o circulatorio y debe evitarse.
- Exploración hacia arriba y hacia abajo. Ajustar el marco de la plataforma de trabajo y las ruedas para el eje x y eje y.
- Como primer paso identificar ambos riñones. Generalmente aparecen como estructuras homogéneas hyperechogenic en la parte inferior del abdomen. Los conectados renalis de la vena se pueden encontrar fácilmente más que conduce a la vena cava inferior (figura 13).
- Utilice el lienalis de la vena sirve como punto de referencia para el páncreas. Intento de distinguir entre los renalis de la vena y lienalis de la vena. Tras la detección de los lienalis de la vena puede localizarse exactamente el páncreas. El páncreas normal es más bien una membrana transmite a través de la cavidad abdominal de una estructura sólida (figura 14 y figura 15).
7. pancreático Tumor detección y evaluación de volumen
- Identificar lesiones pancreáticas de todas las estructuras circundantes. Generalmente aparecen como masas de tejido redondo o alargado no homogéneo hipoecoico (figura 16). El tumor es generalmente firme y difícilmente puede ser comprimido por la cabeza de exploración. Nota, de vez en cuando puede ser difícil de distinguir claramente entre un tumor y un lazo del pequeño intestino. Preste atención a la peristalsis del intestino que no debe ser observada en tumores de páncreas.
- Sobre pantalla de detección de tumor hacia arriba y hacia abajo para obtener una impresión del tamaño total y miden el diámetro más grande con la pinza de ultrasonido. Una vez que se encuentra una imagen adecuada, congelar la pantalla y utilice la herramienta de medida para determinar exactamente el tamaño del tumor. Tenga en cuenta, para su uso posterior, será importante distinguir si un tumor se localiza en la cola, el cuerpo o la cabeza del páncreas.
- Antes de cambiar a modo en vivo, no se olvide de guardar imágenes para grabar la obra. Tenga en cuenta, mientras que la congelación de la imagen puede pasar que se suelte la rueda de ajuste, y la sonda de ultrasonido se presiona aún más para el abdomen de ratón. Por lo tanto, fijar el ajuste de la compresión antes de cambiar el modo de congelación.
- Después de terminar la medición del primer plano gire la cabeza de scan de 90° en posición longitudinal (figura 17), o girar el ratón a su lado, para detectar dilatación longitudinal de los tumores. Algunos tumores pueden requerir cambiar la posición del ratón para una visibilidad adecuada. Para los tumores de la cola pancreática, el ratón puede colocarse sobre su lado derecho (figura 10 y figura 19), para tumores pancreáticos de la cabeza en su lado izquierdo (figura 11 y figura 20).
8. cuantificación del volumen del Tumor
Nota: Uno de los principales objetivos de todos los esfuerzos es la correcta determinación del volumen del tumor. Aunque existen varias técnicas de un método de cálculo incluyendo la fórmula de un elipsoide es preferido en la Universidad médica centro de Go! ttingen.
- Equipado con todos los tres diámetros previamente obtenidos, calcular el volumen aproximado del tumor correspondiente (figura 21).
- Alternativamente, utilice un sistema del motor de la cabeza de exploración a realizar un análisis automatizado de la región del tumor con cálculo de volumen posterior y 3-D-reconstrucción.
9. recuperación
- Después de la exploración, retire con cuidado toda la cinta adhesiva y retire con cuidado todo el gel ultrasonido con tejido seco.
- Cuidadosamente transfiera el ratón en la jaula de recuperación ( figura 21). Evitar los tejidos de revestimiento en la cara de mouse´s que puede causar el deterioro respiratorio. Se debe preferir una posición lateral de recuperación.
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Representative Results
Imágenes por ultrasonido son una técnica versátil y no invasivo que se utiliza para tratar varios temas en modelos murinos de enfermedades humanas. En comparación con todas otras imágenes enfoques principales ventajas son eficacia de alto rendimiento, costo, tiempo de adquisición breve y la proyección de imagen en tiempo real. Sin embargo, esta herramienta necesita conocimientos para generar imágenes precisas y de alta calidad. Particularmente en el caso de los artefactos no deseados por lo menos algo de experiencia con ultrasonido proyección de imagen en general es muy útil. En relación con el cáncer de páncreas, esta herramienta permite determinar la aparición del tumor, la progresión y respuesta al tratamiento. Además, por la medida de diámetros permite una cuantificación exacta del volumen tumoral con el tiempo. Este estudio se muestra y describe en detalle cómo utilizar la proyección de imagen de ultrasonido de alta resolución como una herramienta de detección para el cáncer de páncreas en modelos de ratón modificados genéticamente.
Figura 1 : Palpación abdominal. Fijación de mano suavemente levanta cola mientras no fijación mano inicia procedimiento moviendo suavemente arriba y abajo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 2 : La exploración área con visión general de todos los elementos necesarios. desinfección (1), esponjas de Gasa (2), isopropanol al 70% (3), gel de ultrasonido con intestino de vidrio (4), ungüento oftálmico (5), paños de tejido (6), cinta médica (7), depósito de agua (8), podadoras del animal doméstico (9) depilatorio crema con recipiente (10), consejos de algodón para aplicar la piel ungüento o ultrasonido gel de ojos (11). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 3 : Área de vaporizador de isoflurano. Etapa de trabajo con porta sondas ajustable (1), cámara de inducción (2) incluye vaporizador de isoflurano (3). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 4 : Dispositivo de ultrasonido. El sistema de ultrasonido se suministra con tres sondas de ultrasonido y los puertos correspondientes. Teclado y ratón de PC están incluidos en el sistema. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 5 : Jaula de la recuperación. La parte inferior de la jaula se prepara con tejido delgado y precalentada para permitir la calefacción suficiente tras el procedimiento. La temperatura se muestra en grados Celsius (° C). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 6 : Ratón fijo en el escenario de trabajo. El ratón se coloca en una posición supina en el escenario de trabajo. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 7 : Ratón afeitado después de usar cortauñas para mascotas. Se corta la piel abdominal, pero partes pequeñas de cabello persisten que regularmente causan artefactos. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 8 : El uso de crema depilatoria. Administrar una fina capa de crema depilatoria en el afeitado región del abdomen. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 9 : Abdomen totalmente depilado de un ratón. Un montón de agua se utiliza para enjuagar los restos de crema, sólo un retiro completo de la piel permite un óptimo procedimiento. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 10 : Lado derecho del ratón. Orientación óptima para el análisis de tumores de la cola pancreática. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 11 : Lado izquierdo del ratón. Orientación óptima para el análisis de tumores pancreáticos de la cabeza. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 12 : Sonda de ultrasonido en abdomen ratón. Para evitar cualquier lesión al ratón no use demasiada presión. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 13 : Imagen de ecografía de la parte derecha abdominal Principal vaso estructuras tales como la aorta abdominal y vena cava inferior están situadas en proximidad cercana a los riñones y el hígado. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 14 : Imagen de ecografía de la parte abdominal izquierda Entre el riñón izquierdo y el bazo la estructura membranosa del páncreas se encuentra, como un hito, lienalis de la vena se ejecuta a través del órgano (flecha amarilla) y puede ser utilizado como una estructura rectora. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 15 : Frontera del páncreas. El estómago (con contenido) marca la frontera izquierda del páncreas (flecha amarilla). Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 16 : Tumor pancreático identificación. Posición supina con un hypodense apareciendo ronda tumor pancreático, la flecha indica el borde de tejido normal circundante. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 17 : Posición longitudinal. Determinación de la longitud del tumor pancreático. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 18 : Análisis longitudinal de tumor pancreático. Interferencia causada por el aire llena duodeno. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 19 : Lado derecho del ratón: tumor de la cola pancreática haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 20 : Lado izquierdo del ratón: tumor pancreático cabeza haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 21 : Cuantificación de volumen de tumor. Después de la adquisición de todos los tres diámetros en las dos posiciones de análisis anteriormente indicados, se realiza un cálculo de volumen. Por lo tanto, se utiliza la fórmula de un elipsoide: 4/3 π a/2 * b/2 * c/2. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
Figura 22 : Recuperación de. Después de la exploración del animal se transfiere a una placa de calentamiento hasta que se recuperó completamente, aviso el ungüento de ojo blanco en el ojo del ratón. Haga clic aquí para ver una versión más grande de esta figura.
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Discussion
Con este protocolo, se proporciona una descripción detallada para la cuantificación de los tumores pancreáticos usando proyección de imagen ecografía abdominal de alta resolución en modelos de ratón modificados genéticamente. Sastra et al publicado recientemente, una descripción detallada cómo cuantificar los tumores pancreáticos en modelos de ratón, pero no visualizadas instrucciones sobre la preparación y manipulación como requisito previo para todos los otros pasos se muestra11. El objetivo general de este manuscrito es proporcionar una guía visual completa para Ecografía de alta resolución en ratones.
Aunque nos enfocamos nuestra descripción endógenos tumores pancreáticos en ratones modificados genéticamente, este método puede utilizarse también para modelos de trasplante ortotópico. Para los modelos de orthotopic, incluso tumores muy pequeños hasta 1-2 mm puede detectarse abdominal para investigar la aparición de tasa y tumor de tomar. Como palpación abdominal puede ser subjetiva y difícil de reproducir, examen de ultrasonido puede aplicarse sin previa palpación del modelo KPC para detectar la aparición de tumores pancreáticos muy pequeño. Además, estructuras abdominales como pequeños lazos del intestino llenados de aire pueden ser superpuestas. En este sentido, podría ser útil cambiar la posición del animal en la etapa de trabajo. Mayoría de los tumores puede ser visualizada en una posición supina; sin embargo, algunos tumores pueden ser detectados sólo cuando el ratón se coloca sobre su lado izquierdo (tumores pancreáticos de la cabeza) o derecha (tumores de la cola pancreática). Así, un posicionamiento adecuado del ratón es fundamental para aumentar la visibilidad eficiente.
Podría darse visibilidad insuficiente de órganos abdominales o variabilidad anatómica. Para aumentar la visibilidad y resolución de las imágenes de ultrasonido, ajustes de brillo y contraste, así como el enfoque debe modificarse en consecuencia. Artefactos de imagen pueden ser debido a defectuoso/incorrecto sonda, extirpación incompleta de piel de ratón, una cantidad insuficiente de gel de ultrasonido o insuficiente presión de contacto de la sonda con el abdomen de ratón. Además, inclina ligeramente la punta de prueba puede también considerablemente mejorar la visibilidad.
Además, cinética de crecimiento del tumor se puede monitorizar longitudinalmente por ultrasonido animal pequeño. Principales ventajas de la técnica incluyen bajos costos (dados la disponibilidad de una máquina de ultrasonido), sin exposición a la radiación, tiempo de análisis corto y así pequeña cepa de ratones. Especialmente a la luz de los estudios longitudinales de cáncer, la exploración repetida es fácil de realizar y pone poco esfuerzo en los animales sin necesidad de largos periodos de sedación o anestesia necesaria para pequeños animales exploraciones de CT o MRI.
Ya que actualmente se están desarrollando avances tecnológicos con los más potentes sistemas de ultrasonido con una resolución mejorada y herramientas de optimización de imagen cada vez más automatizado, animal pequeño, ultrasonido de alta resolución se utilizará más a menudo en vario preclínica disciplinas en el futuro. Pasos críticos en el protocolo incluyen ratón correcta preparación y colocación, así como la correcta identificación de los órganos abdominales y vasos.
El ultrasonido es una herramienta valiosa para la detección y cuantificación de tumores pancreáticos en genéticamente modificados de alta resolución y modelos de ratón ortotópico. En comparación con otras técnicas imaginando establecidos este método basado en ultrasonido combina tiempos de sesión rápido y rentabilidad. Puesto que la correcta adquisición e interpretación de imágenes de ultrasonido requiere experiencia y una formación práctica adecuada este protocolo video sirve como una guía detallada de todos los aspectos en modelos de cáncer de páncreas.
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Disclosures
Los autores no tienen nada que revelar.
Acknowledgments
Esta investigación fue apoyada por la Deutsche Krebshilfe (Max Eder grupo AN: 110972), una beca de tesis doctoral de la DGVS (a SMB) y una beca de Else-Kröner-Fresenius-Fundación (a RGG) en la Universidad médica centro de Go! ttingen. Agradecemos a Jutta Blumberg y Ulrike Wegner para la asistencia técnica de expertos. También agradecemos a los técnicos animales en el Animalario de la Universidad médica centro de Go! ttingen para ratón manteniendo. Todos los experimentos fueron realizados según las normas de bienestar animal alemán.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Visual Sonics Vevo2100 High Resolution Ultrasound System, including imaging stage and anesthesia line | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11945 | |
| Vevo 2100 MicroScan Transducer MS-550-D (22-55MHz) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | VS-11874 | |
| Vevo Anesthesia System (anesthesia induction chamber with fresh and waste gas inlet) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-12055 | |
| Vevo Imaging Station (working stage with nose cone for anesthesia supply) | FUJIFILM VisualSonics Inc, Canada | SA-11982 | |
| electronic pet clippers | Panasonic Marketing Europe, Germany | 5025232484324 | Panasonic ER-PA10-s |
| Labotect Hot plate | Labor tech Göttingen, Germany | 13854 | |
| eye cream (ophthalmic ointment) | Schülke&Mayr, Germany | 9080249 | |
| veterinary isoflurane | Abbvie, Germany | 4831867 | |
| depilatory cream | RB healthcare UK, United Kingdom | 8218535 | |
| 70% ethanol (v/v) in distilled water | TH. Geyer, Germany | 22941000 | |
| ultrasound gel | Asmuth, Germany | 13477 | |
| tissue wipes | Kimberly-Clark Germany, Germany | 7558 | |
| cotton tips | Meditrade, Germany | 75481116 | |
| glass bowl for ultrasound gel | ARC France, France | H1149 | |
| water bowl | W & P Trading Co., USA | B00K2P6PLQ | |
| gauze sponges | Fuhrmann, Germany | 960504 |
References
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