Aqui, apresentamos um protocolo para a síntese de sulfato de condroitina placentária A peptídeo de vinculação (plCSA-BP)-conjugados lipid-polímero nanopartículas através de etapa única sonication e bioconjugate técnicas. Estas partículas constituem uma nova ferramenta para a entrega de alvo da terapêutica de tumores mais humanos e trophoblasts da placenta para tratar cancros e anormalidades da placenta.
É necessária uma assinatura do JoVE para visualizar este conteúdo. Faça login ou inicie seu teste gratuito.
Artigo de método
Síntese e caracterização de placentária Condroitina sulfato de uma (plCSA) - Targeting Lipid - nanopartículas de polímero
* These authors contributed equally
Neste artigo
Resumo
Resumo
Um método terapêutico eficaz câncer reduz e elimina tumores com mínima toxicidade sistêmica. Nanopartículas ativamente direcionamento oferecem uma abordagem promissora para a terapia do câncer. O sulfato de condroitina placentária glicosaminoglicano um (plCSA) é expressa em uma ampla gama de células cancerosas e trophoblasts da placenta e proteína da malária que var2csa especificamente pode ligar para plCSA. Um peptídeo de sulfato de condroitina placentária relatado A ligação (plCSA-BP), derivado da malária proteína VAR2CSA, especificamente também pode ligar para plCSA em células cancerosas e trophoblasts placentárias. Daí, nanopartículas plCSA-BP-conjugado podem ser usadas como uma ferramenta para entrega de drogas específicas para cânceres humanos e trophoblasts placentárias. Neste protocolo, descrevemos um método para sintetizar lipídios plCSA-BP-conjugados-polímero nanopartículas carregadas com doxorrubicina (plCSA-DNPs); o método consiste em um único sonication passo e bioconjugate técnicas. Além disso, vários métodos para caracterizar plCSA-DNPs, incluindo a determinação de suas propriedades físico-químicas e celular captação pelas células da placenta Coriocarcinoma (JEG3), são descritos.
Introdução
Um método terapêutico eficaz câncer reduz e elimina tumores com mínima toxicidade sistêmica. Daí, tumor seletivo segmentação é a chave para explorar métodos terapêuticos bem sucedidos. Nanopartículas para oferecer uma oportunidade promissora para a terapia do câncer, e moleculares assemblies com diferentes grupos funcionais irão melhorar a eficácia da droga e reduzir os efeitos colaterais associados1,2. Além disso, os sistemas de nanopartículas principalmente utilizam passiva e ativa como alvo para atingir o alvo tumores3.
Segmentação passiva explora as carac....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Protocolo
1. preparação das soluções estoque
- Prepare uma solução aquosa de etanol a 4% diluindo com 100 mL de água ultrapura, 4 mL de etanol absoluto. Armazenar a solução a 4 ° C.
Nota: Água ultrapura é definida como a água sem contaminantes, como bactérias, partículas, íons ou nucleases. Água ultrapura foi Obtida de um sistema de purificação de água com uma resistividade de alvo de até 18,2 mΩ·cm, que significa baixa contaminação aniônica. - Prepare um 1 mg/mL solução de lecitina de soja, dissolvendo-se 20 mg de lecitina de soja em 20 mL de solução aquosa de etanol a 4%. Armazenar a solução estoque da lecitina de soja a 4 ° C.
- Prepare um 25 mg/mL....
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Resultados
Neste protocolo, lecitina de soja, DSPE-PEG-COOH e PLGA são um polímero representativo, lipid-PEG-COOH conjugado e lipídios, respectivamente. A síntese de nanopartículas de lipid-polímero plCSA-alvo através de uma única etapa sonication método e uma técnica EDC/NHS é ilustrada na Figura 1. Primeiro, em condições de sonication, lecitina de soja, PLGA e DSPE-PEG-COOH auto-montagem para shell-núcleo de forma estruturada DNPs. O núcleo consiste de PLGA e.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Discussão
Este protocolo fornece um método eficiente e reproduzível para a síntese de nanopartículas de lipídios-polímero plCSA-BP-conjugados. O método passo a passo sonication para preparar nanopartículas de lipídios-polímero é rápido, reprodutível e diferente do típico nanoprecipitation métodos que envolvem o aquecimento, evaporação ou num Vortex. Portanto, o método desenvolvido reduz significativamente o tempo de síntese. Além disso, a EDC/NHS bioconjugate utilizado neste protocolo é uma técnica comumente usada e conveniente co.......
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Divulgações
X.F. e B.Z. são os inventores sobre a patente PCT/CN2017/108646 e 201710906587.6 submetidos SIAT que abrange um método de síntese de nanopartículas plCSA-alvo e aplicação. Não há conflitos de interesse potenciais foram divulgados por outros autores.
Agradecimentos
Este trabalho foi financiado por doações da pesquisa nacional de chave e programa de desenvolvimento da China (2016YFC1000402), Fundação Nacional de ciências naturais (81571445 e 81771617) e a ciência Natural Fundação da província de Guangdong (2016A030313178) para O fundo de investigação do Basic de Shenzhen (JCYJ20170413165233512) para X.F. e X.F.
....Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| peptídeo plCSA | Shanghai GL Biochem | 573518 | para síntese de peptídeos |
| Etanol absoluto | Sinopharm 10009218 químico | para síntese de nanopartículas | |
| Lecitina de soja | Avanti Polar Lipids | 441601 | para síntese de nanopartículas |
| DSPE-PEG-COOH | Avanti Polar Lipids | 880125 | para síntese |
| de nanopartículasDoxorrubicina | JKChemical | 113424 | para síntese de nanopartículas |
| Acetonitrila | Shanghai Lingfeng | 1008621 | para síntese de nanopartículas |
| PLGA | Sigma-Aldrich | 719897 | para síntese de nanopartículas |
| Processador ultrassônico | Sonics | VCX130 | para síntese de nanopartículas |
| Filtro centrífugo (MWCO 10 kDa) | Millipore | UFC801024 | para centrífuga de purificação de nanopartículas |
| Sigma | 3-18KS | para purificação de nanopartículas | |
| Ácido 2-[morfolino] etanossulfônico (MES) | Sigma-Aldrich | M3671 | para conjugação de peptídeos |
| Cloridrato de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) | Sigma-Aldrich | 3450 | para conjugação de peptídeos |
| N-hidroxisuccinimida (NHS) | Sigma-Aldrich | 56480 | para conjugação de peptídeos |
| Bolsas de diálise | Spectrum | 132592T | para purificação de nanopartículas |
| PBS | Hyclone | SH30028.01 | para cultura de células |
| Tubos de centrífuga de 10 mL, polipropileno | Aladdin | S-025 | para síntese de nanopartículas |
| Tubos de centrífuga de 15 mL, polipropileno | Corning | 430791 | para várias aplicações |
| 0,22 μ m filtro de seringa estéril | Millipore | SLGV033RB | para purificação de nanopartículas |
| seringa de 1 ml, polipropileno | BD | 328421 | para síntese de nanopartículas |
| Malvern Zetasizer | Malvern | Nano ZS | para analisador de tamanho de partícula |
| Ácido | para TEM | ||
| Grade TEM | EMCN | BZ10024a | para TEM |
| Espectrômetro UV-VIS | Leagene | DZ0035 | de transmissão |
| TEM | JEOL | JEM-100CXII | para analisador de tamanho de partícula |
| Reagente BCA A | Thermo Fisher Scientific | 23228 | para ensaio |
| BCA Reagente BCA B | Thermo Fisher Scientific | 23224 | para ensaio BCA |
| Placas de 96 poços | Corning | 3599 | para BCA leitor |
| de placas | Thermo Fisher Scientific | Multiskan™ GO | para ensaio BCA |
| Placas de 12 poços | Corning | 3513 | para cultura de células |
| JEG3 célula | Banco de células da Academia Chinesa de Ciências | TCHu195 | Planeta humana |
| DMEM / F12 | Hyclone | SH30272.01 | fenol sem vermelho |
| Soro bovino fetal (FBS) | GIBCO | 10100 | para cultura de células |
| Penicilina / estreptomicina | GIBCO | 15070063 | para cultura celular |
| Microscópio de fluorescência | OLYMPUS | CKK53 | para captação celular |
| Paraformaldeído | Shanghai Lingfeng | 1372021 | para captação celular |
| DAPI | Sangon Biotech | A606584 | para captação celular |
| Meio de montagem | Vida | útil P36961 | para captação celular |
Referências
- Davis, M. E., Shin, D. M. Nanoparticle therapeutics: an emerging treatment modality for cancer. Nature Reviews Drug Discovery. 7 (9), 771(2008).
- Nie, S., Xing, Y., Kim, G. J., Simons, J. W. Nanotechnology applications in cancer. Annual Review of Biomedical Engineering. 9, 257-288 (2007).
- Jabir, N. R., et al.
Acesso restrito. Inicie sessão ou comece um teste para visualizar este conteúdo.
Reimpressões e permissões
