Summary
Qui, presentiamo un protocollo per l'elettroagopuntura (EA) efficiente e rapida nei topi o nei ratti giovani utilizzando un supporto tridimensionale (3D) stampato. Questa tecnica consente di operare contemporaneamente su più animali, risparmiando tempo e aumentando l'efficienza sperimentale.
Abstract
L'elettroagopuntura (EA) è ampiamente utilizzata per trattare varie condizioni di salute. Tuttavia, il meccanismo alla base del trattamento con EA rimane poco chiaro, ostacolandone la promozione. Lo studio meccanicistico richiede modelli murini o di ratti per affrontare questo problema. Tuttavia, questi animali non obbediscono al processo sperimentale, che richiede molto tempo. Per risolvere questi problemi, abbiamo progettato un fissatore di massa per il corpo di piccoli animali stampato in 3D per migliorare l'efficienza degli esperimenti sugli animali di EA. Questo video mostra in dettaglio come utilizzare il fissatore per eseguire EA di massa su topi o ratti giovani. Per la selezione dei punti di agopuntura, sono state scelte la linea obliqua anteriore del vertice temporale (testa MS6) e il punto Tianshu (ventre ST25) per verificare l'effetto del dispositivo di fissazione con posizionamento prono e posizionamento supino. L'utilizzo del supporto per piccoli animali stampato in 3D consente di immobilizzare e trattare più roditori contemporaneamente, riducendo il tempo e le risorse necessarie per l'esperimento. Questa tecnica potrebbe essere applicata ad altri modelli animali stampando in 3D diverse dimensioni e potrebbe potenzialmente essere utilizzata per varie condizioni di fissaggio. Il dispositivo è utile per la promozione della ricerca scientifica sperimentale in EA.
Introduction
La terapia con elettroagopuntura (EA) è un metodo unico in cui gli aghi per agopuntura vengono inseriti nel cuoio capelluto e collegati a un'elettromacchina per stimolare punti specifici1. A differenza della stimolazione manuale, l'EA consente un migliore controllo della stimolazione stabilizzando frequenze e forme d'onda specifiche per ottenere effetti terapeutici ottimali2. Secondo un sondaggio, l'81,2% delle istituzioni mediche in Cina utilizza l'EA o l'agopuntura manuale per trattare paralisi cerebrale, nevralgia, paralisi facciale e altre condizioni. Nonostante la sua popolarità, il meccanismo specifico di efficacia dell'EA è ancora sconosciuto, il che ha ostacolato la sua promozione e applicazione nel trattamento riabilitativo delle malattie neurologiche 1,2,3. Sono necessarie ulteriori ricerche per comprendere appieno il meccanismo di efficacia dell'EA e per promuoverne l'uso nel trattamento riabilitativo delle malattie neurologiche.
Mentre l'influenza dell'agopuntura si espande in tutto il mondo, molti studi hanno già indagato i meccanismi dell'EA eseguiti su modelli di roditori, come i modelli di ratto o topo 1,2,3. Diversi problemi si riscontrano spesso negli esperimenti sui roditori di EA. Il primo è come immobilizzare i roditori senza anestesia, poiché l'agopuntura eseguita su soggetti svegli riflette maggiormente la pratica clinica. Inoltre, alcuni esperimenti richiedono che gli animali siano svegli per osservare gli effetti del trattamento 2,3. Un'altra sfida è individuare con precisione i punti di agopuntura nei topi o nei ratti che corrispondono a quelli negli esseri umani. La localizzazione precisa dei punti di agopuntura nei roditori sperimentali è attualmente oggetto di studio da parte di molti studiosi 4,5. In questo protocollo sono stati selezionati MS6 e ST25, che sono stati chiaramente definiti nei roditori dalla trasformazione della localizzazione anatomica umana. MS6 è comunemente usato per il trattamento di alcune malattie cerebrali, come il morbo di Parkinson6. ST25 è solitamente usato per trattare problemi gastrointestinali, come la diarrea7. Questi due agopunti sono stati scelti principalmente per dimostrare come i roditori possano essere efficacemente immobilizzati sia in posizione supina che prona. Inoltre, questi agopunti sono stati ampiamente studiati e offrono spunti significativi per scopi di ricerca 6,7.
Il metodo precedente di immobilizzare un singolo ratto per gli esperimenti non è solo dispendioso in termini di tempo, ma anche difficile da gestire da parte di una sola persona8. Inoltre, a causa della mancata collaborazione degli animali, il tasso di successo è relativamente basso nella pratica. Pertanto, c'è una necessità critica di creare un modello animale facilmente stabilibile con caratteristiche stabili per migliorare l'efficienza dell'esperimento. In questo articolo, è stato introdotto un supporto stampato in 3D per piccoli animali che potrebbe facilmente immobilizzare più roditori, portando a una restrizione motoria. Lo scopo di questo lavoro è quello di somministrare trattamenti EA a un gruppo di giovani ratti o topi, concentrandosi sulle strategie per la restrizione di massa dei topi, l'identificazione e la stimolazione dei punti di agopuntura MS6 e ST25.
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Protocol
Gli esperimenti in questo studio sono conformi al principio delle "3R" dell'etica animale e sono stati approvati dal Comitato per il benessere degli animali da laboratorio e l'etnia dell'Università di Medicina dell'Esercito (AMUWEC20234543).
1. Preparazione del dispositivo di fissazione del corpo dei roditori
- Progetta un supporto per animali di piccola taglia basato sul brevetto cinese del modellodi utilità 9.
- Produci il dispositivo attraverso la tecnologia di stampa 3D.
- Preparare una corda lunga 2 m e dividerla in 6 corde. Infilare queste 6 corde attraverso i fori del fissatore. Utilizza la fibbia a molla per fissare le estremità della corda, facilitando la regolazione delle dimensioni dell'anello.
NOTA: Il fissatore può essere prodotto da qualsiasi azienda dotata di tecnologia di stampa 3D sulla base di un disegno di progettazione. Il disegno di progettazione del dispositivo è mostrato nella Figura 1. Il fissatore utilizzato in questo studio è stato prodotto da una stampante 3D con un metodo di stampa chiamato modellazione a deposizione fusa (FDM), noto anche come fabbricazione di filamenti fusi (FFF)10. Questo metodo di produzione additiva stampa le parti del progetto strato per strato depositando selettivamente il materiale nella forma fusa in un percorso predeterminato. Il processo utilizza polimeri termoplastici che si presentano in filamenti per creare la struttura fisica finale. L'apparato di immobilizzazione utilizzato in questo studio può assicurare tre animali contemporaneamente, richiedendo sei corde, con ogni animale che richiede un paio di corde: una per il collo e una per il tronco.
2. Preparazione dei roditori
- Acquista 3 ratti Sprague-Dawley (10-40 g, 7-45 giorni) e 3 topi C57 BL/C (5-40 g).
- Allevare gli animali in una stanza con un ciclo giorno/notte di 12 ore, una temperatura ambiente di 21-23 °C e un'umidità del 45%-60%. Disinfettare e ventilare regolarmente l'ambiente di alimentazione e consentire agli animali di mangiare e bere liberamente.
3. Fissaggio dei roditori al fissatore (posizione prona)
- Posizionare la testa del roditore nel foro a forma di U davanti al fissatore, con il roditore in posizione prona. Passa il corpo del roditore attraverso due anelli di corda.
- Fissare le corde intorno al collo e all'addome del roditore, assicurandosi che non possa scappare, ma non così strettamente da causare difficoltà respiratorie e morte.
- Il passaggio chiave è fissare il collo in posizione. Lasciare uno spazio di 2-5 mm tra il collo del roditore e la corda. Assicurarsi che la corda non sia troppo tesa per consentire agli animali di strangolarsi o troppo allentata per scappare.
- Fissare gli altri roditori allo stesso modo nel dispositivo.
- Ripetere i passaggi di fissazione di cui sopra (3.1-3.2) per 3 giorni per ridurre al minimo la potenziale risposta allo stress causata dalla procedura di fissazione. Ripetere la procedura di fissazione per 3 giorni consecutivi, con ogni sessione della durata di 5 minuti al giorno.
NOTA: Per garantire che i roditori non fossero eccessivamente stressati durante la procedura di fissazione, abbiamo ripetuto la procedura per 3 giorni consecutivi. Ogni sessione è durata 5 minuti al giorno, fornendo ampio tempo ai topi o ai ratti per acclimatarsi alla procedura e riducendo al minimo qualsiasi potenziale disagio. - Strat EA dal giorno 4.
- Per prevenire la diffusione di malattie, immergere un batuffolo di cotone sterile in alcol al 75% e strofinare accuratamente il supporto per pulirlo e disinfettarlo prima e dopo ogni utilizzo. Utilizzare guanti e altri dispositivi di protezione per evitare potenziali rischi per la salute durante la manipolazione dei roditori.
4. Esecuzione di EA in topi o ratti giovani (MS6)
- Scegli aghi sterili monouso per agopuntura da 0,25 mm x 13 mm.
- Trovare i punti di agopuntura in base alla posizione anatomica e confermare la profondità di inserimento in corrispondenza del punto di agopuntura.
NOTA: MS6 si trova sul lato laterale della testa. Questa regione della testa passa attraverso la connessione tra Shencong (Ex-hn1) e Xuanli (GB6), nota anche come parietale anteriore (Du21). MS6 corrisponde all'espressione del giro precentrale della corteccia cerebrale sul cuoio capelluto. Ex-hn1 si trova 0,5 cm dietro il punto medio della linea mediana antero-posteriore della testa. GB6 si trova nel punto medio della parte anteriore dell'orecchio e nell'angolo finale dell'occhio. Il nervo sopratrocleare superiore, il nervo sopraorbitale, il nervo occipitale e il nervo auricolotemporale sono distribuiti in esso. MS6 è usato principalmente per trattare l'ictus e l'encefalopatia, come i disturbi motori. - Ruotare lentamente e inserire gli aghi sterili bilateralmente in MS6 ad una profondità di 3/5 dallo Shenchong anteriore (Exhn1) allo Xuanli (GB6) lungo il sottocutaneo in 3 roditori, rispettivamente.
- Collegare un lato del cavo di collegamento allo strumento EA.
- Collegare un altro lato del cavo di collegamento contenente le clip EA positive e negative ai gambi dell'ago per agopuntura a sinistra e a destra MS6.
- Accendere lo strumento EA.
- Ruotare il pulsante (Funzione/Scegli interruttore) per impostare la frequenza e la modalità funzione.
- Impostare la frequenza su 10 Hz e scegliere una modalità Onda continua .
- Ruotare il pulsante corrispondente (Regola intensità) per impostare l'intensità. Ogni pulsante di regolazione dell'intensità controlla l'intensità della corrente dei roditori del filo collegato sotto di esso. Regolare l'intensità della corrente all'intervallo accettabile di roditori, di solito 1-2 mA, della durata di 5 minuti.
NOTA: È importante monitorare la respirazione e il comportamento dei roditori durante la procedura per assicurarsi che non provino alcun disagio o disagio. Se il ratto sembra essere in difficoltà o sofferente, la procedura deve essere interrotta immediatamente.
5. Fissaggio dei roditori al fissatore (posizione supina)
- Posizionare le teste del roditore nel foro a forma di U davanti al fissatore, con il roditore in posizione prona. Passa il corpo del roditore attraverso due anelli di corda.
- Fissare la corda intorno al collo e all'addome del roditore, assicurandosi che non possa fuoriuscire, ma non così stretta da causare difficoltà respiratorie e morte.
NOTA: I punti da annotare durante il fissaggio sono gli stessi del passaggio 3.2. - Fissa gli altri roditori allo stesso modo.
- Come nel passaggio 3.4, ripetere i passaggi di fissazione precedenti per 3 giorni per ridurre la risposta allo stress dei roditori.
- Strat EA dal giorno 4.
NOTA: La disinfezione viene eseguita come indicato al punto 3.6.
6. Esecuzione di EA (ST25)
- Scegli aghi sterili monouso per agopuntura da 0,25 mm x 13 mm.
- Trovare i punti di agopuntura in base alla posizione anatomica e confermare la profondità di inserimento in corrispondenza del punto di agopuntura.
NOTA: ST25 si trova a livello dell'ombelico. Il posizionamento di questo punto nei roditori richiede prima di tutto di misurare la lunghezza della zampa del roditore. ST25 si trova a 2/3 della lunghezza della zampa accanto all'ombelico. Ad esempio, se la zampa misurata del roditore è di 0,6 cm, ST25 si trova a 0,4 cm a destra e a sinistra dell'ombelico. - Ruotare lentamente e penetrare gli aghi sterili in ST25 bilaterale a una profondità di 4-8 mm su 3 roditori, rispettivamente.
- Collegare un lato del cavo di collegamento allo strumento EA.
- Collegare un altro lato del cavo di collegamento contenente le clip EA positive e negative ai gambi dell'ago per agopuntura a sinistra e a destra ST25.
- Accendere lo strumento EA.
- Ruotare il pulsante (Funzione/Scegli interruttore) per impostare la frequenza e la modalità funzione.
- Impostare la frequenza su 10 Hz e scegliere la modalità onda continua.
- Ruotare il pulsante corrispondente (Regola intensità) per impostare l'intensità. Ogni pulsante di regolazione dell'intensità controlla l'intensità corrente del ratto del filo collegato sotto di esso. Regolare l'intensità della corrente all'intervallo accettabile di roditori, di solito 1-2 mA, della durata di 5 minuti.
NOTA: Le osservazioni sono state le stesse del passaggio 4.6.
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Representative Results
La planimetria del fissatore per il corpo animale che abbiamo progettato è mostrata nella Figura 1. Inoltre, è stato presentato un modello grafico 3D di questo fissatore per fornire una visione completa del progetto (File supplementare 1). Si tratta di un dispositivo che consente di immobilizzare 3 roditori ed eseguire EA contemporaneamente. I ratti e i topi erano limitati al fissatore nello stato di veglia e sia la posizione prona che quella supina potevano essere fissate saldamente senza causare lesioni ai roditori (Figura 2 e Figura 3). Con l'aiuto del fissatore, i punti di agopuntura MS6 e ST25 sono stati localizzati con successo e agugliati nei roditori (Figura 4 e Figura 5).
Per controllare le variabili e convalidare l'efficacia di questo approccio di fissazione, uno sperimentatore ha immobilizzato 3 ratti (Video 1) o 3 topi per tre prove consecutive in uno studio comparativo (Tabella 1). La scoperta ha dimostrato che il tempo medio per l'immobilizzazione di 3 ratti in posizione prona e supina utilizzando questo strumento è stato rispettivamente di 77,1 s ± 7,8 s e 74,9 s ± 8,6 s (media ± DS). Per quanto riguarda 3 topi, il tempo medio di immobilizzazione in posizione prona e supina utilizzando questo fissatore è stato rispettivamente di 72,0 s ± 10,5 s e 62,3 ± 4,2 s (media ± DS). Entrambi i gruppi di ratti e topi sono stati immobilizzati con successo sul dispositivo e non sono scappati durante il trattamento EA di 5 minuti (Figura 2 e Figura 3). A un'intensità EA di 1-2 mA, topi e ratti si sono sentiti a proprio agio e non hanno lottato violentemente. La respirazione nei topi e nei ratti è stata stabile e non si sono verificate morti improvvise negli animali. Dopo il trattamento, i topi e i ratti sono rimasti sani e sono sopravvissuti.
Figura 1. Planimetria del fissatore di roditori in lotti. (1) Dispositivo porta roditori, diviso in tre parti. (2,3) Pilastri: usati per fissare gli arti di topi o giovani ratti. (4) Grotta: usato per fissare la testa. (5) Foro: usato per fissare il collo dei giovani ratti. (6) Foro: utilizzato per fissare il corpo. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 2: Fissa i giovani ratti in posizione prona e supina. (A-C) Trattamento EA su agopunto MS6. (D-F) Trattamento EA su agopunto ST25. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 3: Topi fissi in posizione prona e supina. (A-C) Trattamento EA su agopunto MS6. (D-F) Trattamento EA su agopunto ST25. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 4: MS6 nella regione cerebrale. MS6 si trova sul lato laterale della testa ed è posizionato nel punto di connessione tra Shencong (Ex-hn1) e Xuanli (GB6), noto anche come regione parietale anteriore (Du21). Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
Figura 5: Punto bilaterale ST25 in rosso. ST25 si trova a livello dell'ombelico. Il posizionamento di questo punto nel roditore richiede prima di tutto di misurare la lunghezza della zampa del roditore. ST25 si trova a 2/3 della lunghezza della zampa accanto all'ombelico. Ad esempio, se la zampa di misura del roditore è di 0,6 cm, l'ST25 è 0,4 a destra e a sinistra dell'ombelico. Fare clic qui per visualizzare una versione più grande di questa figura.
| Prove | Ratti | Topi | ||
| Posizione prona | Posizione supina | Posizione prona | Posizione supina | |
| (tempo in secondi) | (tempo in secondi) | (tempo in secondi) | (tempo in secondi) | |
| Prova 1 | 75.5 | 65.1 | 60.2 | 62.3 |
| Prova 2 | 70.2 | 80.3 | 80.1 | 70.6 |
| Prova 3 | 85.5 | 79.5 | 75.7 | 65.9 |
| Tempo medio (media ± DS) | 77,1 ± 7,8 | 74,9 ± 8,6 | 72,0 ± 10,5 | 62,3 ± 4,2 |
Tabella 1: Tempo impiegato per fissare ratti e topi in posizione prona e supina. I dati (tempo in secondi) sono stati ottenuti da uno sperimentatore che ha immobilizzato 3 ratti e 3 topi per 3 prove consecutive, rispettivamente. Il tempo medio richiesto è stato determinato calcolando la media e la deviazione standard del tempo impiegato per le 3 prove.
File supplementare 1: file di progettazione del fissatore di roditori da bagno stampato in 3D. Questo modello 3D può essere trascinato per ottenere una visione completa a 360° del progetto. Fare clic qui per scaricare il file.
Video 1: Filmato della fissazione in posizione prona e supina di giovani ratti SD, come descritto in dettaglio nella legenda della Figura 2 . Questo video mostra uno sperimentatore che trattiene 3 ratti sia in posizione supina che prona. Clicca qui per scaricare questo video.
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Discussion
L'elettroagopuntura (EA) è una forma di agopuntura che prevede l'uso di stimolazione elettrica su aghi per agopuntura11. Questa tecnica prevede l'uso di micro-correnti di impulso di intensità e frequenza specifiche per stimolare i punti di agopuntura e ottenere effetti terapeutici potenziati3. Tuttavia, il meccanismo di EA per la guarigione è limitato e richiede un'ampia ricerca di base per dimostrare 1,2,3. I modelli di roditori sono comunemente usati negli studi di base sull'EA 8,12,13 e miriamo a fornire un metodo rapido ed efficiente per condurre questi esperimenti su ratti e topi.
Attualmente, l'esperimento EA si trova ad affrontare molte sfide. La sfida principale è quella di immobilizzare efficacemente i roditori senza anestesia. L'immobilizzazione stabile degli animali è fondamentale e ha un impatto significativo sull'esito dell'esperimento sugli animali. In caso contrario, le funzioni fisiologiche degli animali anestetizzati sono diverse da quelle degli animali svegli e il trattamento clinico di agopuntura viene sempre eseguito su pazienti svegli. Pertanto, gli studi sperimentali con animali svegli sono più pratici per scopi clinici. In precedenza, l'immobilizzazione con una placca di fissaggio era il metodo preferito, ma richiedeva molto tempo e consentiva solo l'intervento di un singolo roditore14. Gli immobilizzatori tradizionali richiedevano anche di legare gli arti del roditore, un processo che richiedeva molto tempo e spesso provocava dolore a causa del fissaggio stretto. Diversi studi hanno implementato il nastro adesivo per i topi, ma la loro capacità di sfuggire facilmente pone sfide significative, in particolare durante le procedure di agopuntura8. Quando ci sono più soggetti sperimentali, l'operazione batch è spesso necessaria per risparmiare tempo e fatica2. Pertanto, abbiamo sviluppato un fissatore per lotti di corpi di animali di piccole dimensioni stampato in 3D che offre diversi vantaggi rispetto ai metodi di fissazione tradizionali15: 1) riduce il tempo di fissazione, migliorando notevolmente l'efficienza sperimentale16; 2) è semplice e facile da usare e non risente di fattori soggettivi 15,16; 3) Ha portato meno dannoso per i roditori; 4) Una volta fissata, l'operazione EA può essere eseguita su più ratti giovani contemporaneamente, risparmiando tempo e consentendo l'osservazione simultanea dei risultati del trattamento.
L'uso della tecnologia di stampa 3D per gli studi sperimentali di EA è una preziosa espansione nel campo della ricerca sull'agopuntura. Il dispositivo può essere regolato su qualsiasi dimensione quando viene stampato in 3D, il che aiuta a eseguire l'agopuntura sperimentale in modo più efficace. La modellazione a deposizione fusa (FDM), nota anche come fabbricazione di filamenti fusi (FFF), un metodo di produzione additiva10, viene utilizzata per la stampa 3D del fissatore. Questo dispositivo è adatto non solo per questo esperimento, ma anche per l'esecuzione di esperimenti come TC o risonanza magnetica su roditori17,18. Inoltre, può essere applicato anche a qualsiasi situazione in cui è necessaria la fissazione di massa, ad eccezione degli studi EA. A causa della prevalenza della tecnologia di stampa 3D, questo dispositivo è facilmente disponibile. Può essere realizzato tramite un produttore di stampa 3D locale. Inoltre, questo dispositivo di fissaggio può essere modificato e personalizzato in base al disegno di progetto. In questo studio, il dispositivo di fissaggio è composto da tre sezioni, ciascuna in grado di fissare un singolo roditore. Se è necessario includere altri roditori o altri animali, il dispositivo può essere ridimensionato proporzionalmente per adattarsi al numero maggiore. Ad esempio, può essere progettato come un dispositivo in grado di riparare 5 topi o anche come dispositivo di fissaggio per altri animali come i conigli.
Un'altra sfida è quella di trovare nei roditori punti di agopuntura che corrispondano agli esseri umani. I punti di agopuntura MS6 e ST25 sono stati scelti per esaminare gli effetti della fissazione in posizione prona e supina. Inoltre, questi due agopunti sono stati studiati da molti studiosi 6,7,19. MS6 è più spesso utilizzato nella ricerca sulle malattie cerebrali, come il morbo di Parkinson, la disfunzione dopo ictus cerebrale, ecc. 6,13,19. MS6 potrebbe migliorare la funzione neurologica dei ratti affetti da ictus ischemico attraverso la modulazione della via di segnalazione JAK/STAT mediata da IL-12 in uno studio precedente13. ST25 viene solitamente utilizzato per il trattamento del tratto gastrointestinale, come la diarrea e la sindrome dell'intestino irritabile (IBS)7,12. Uno studio precedente ha riportato che l'EA applicato esclusivamente al punto ST25 ha mostrato il potenziale per alleviare l'ipersensibilità viscerale, ripristinando anche la normale frequenza delle onde lente e il ritmo del colon nei ratti IBS12. Questi due agopunti sono anche in grado di dimostrare in modo appropriato gli effetti del posizionamento supino e prono nei roditori. Inoltre, questi due agopunti hanno il significato della visualizzazione 6,7,19. Poiché questi due agopunti sono stati studiati da molti studiosi, forniamo un protocollo su come localizzare questi due agopunti nei roditori. È utile per gli esperimenti sugli animali in cui vengono condotti studi MS6 e ST25. Tuttavia, l'attuale studio presenta alcune limitazioni. Ad esempio, la posizione e la profondità di inserimento dell'ago non possono essere misurate oggettivamente e possono variare in base al livello di esperienza dell'operatore.
I nostri esperimenti rispettano il principio delle "3R" dell'etica animale e sono stati approvati dal Comitato per il Benessere degli Animali da Laboratorio e l'Etnia dell'Università di Medicina dell'Esercito. Il passo più impegnativo e cruciale di questo esperimento è trovare un metodo affidabile ed efficiente per immobilizzare in modo sicuro i roditori. Questo perché qualsiasi tentativo di fuga o di morte dei roditori durante la stimolazione EA di 5 minuti comporterà il fallimento dell'esperimento. Il design della grotta anteriore sfrutta la preferenza dei roditori per lo scavo di buche. Posizionare la testa dei roditori all'interno della grotta ha lo scopo di fornire conforto psicologico. Inoltre, le corde utilizzate per fissare la testa e il corpo dei roditori devono essere moderatamente sicure, non rimanendo né eccessivamente allentate né troppo strette per evitare la fuga del roditore e prevenire difficoltà respiratorie. Dopo la stimolazione elettrica, i comportamenti e le risposte dei roditori sono stati attentamente monitorati. Idealmente, quando si applica una corrente di 1-2 mA, i roditori non mostrerebbero lotte aggressive o vocalizzazioni in risposta a scosse elettriche20. Il fissatore può essere utilizzato anche per fissare i roditori in posizione supina, prona e altri tipi di fissaggi secondo necessità. È adatto per una varietà di esigenze sperimentali e l'operazione di fissazione è facile da eseguire21. Tuttavia, ciò ha portato a una limitazione per cui gli animali di varie dimensioni richiedono attrezzature di immobilizzazione su misura di varie dimensioni. Solo gli animali con lievi discrepanze di taglia possono essere trattenuti utilizzando lo stesso dispositivo. Il fissatore di immobilizzazione batch utilizzato in questo protocollo immobilizza in modo efficiente e affidabile i roditori nell'intervallo di peso compreso tra 10 e 40 g. Per gli animali al di fuori di questo intervallo di peso, sono necessari fissatori di immobilizzazione in batch personalizzati per soddisfare le loro esigenze specifiche.
Inoltre, la fissazione in batch dei roditori stampata in 3D utilizzata per le operazioni EA di massa sui roditori offre una maggiore sicurezza in quanto è resistente ai graffi e ai morsi dei roditori. Gli studi sull'EA sui roditori hanno fornito preziose informazioni sui potenziali benefici di questa modalità terapeutica nell'uomo 1,2,3,6,7,11,14. Il dispositivo è utile per la promozione della ricerca scientifica sperimentale in EA. Questa tecnica consente ai ricercatori di condurre esperimenti sugli animali che richiedono l'immobilizzazione degli animali. Inoltre, presenta l'esatta posizione di ST25 e MS6, che può servire come riferimento per coloro che studiano questi due agopunti in futuro. In definitiva, si prevede che questa metodologia porterà a modelli animali preziosi per la ricerca sull'EA.
Il fissatore per topi in batch stampato in 3D descritto in questo documento offre un metodo semplice ed efficiente per condurre esperimenti EA su ratti o topi. Il suo design tiene conto del comfort e della sicurezza degli animali, nonché della necessità di un fissaggio rapido ed efficiente. Questo dispositivo ha il potenziale per risparmiare tempo e fatica nella conduzione di esperimenti sugli animali, promuovendo il progresso della ricerca sull'elettroagopuntura e, in ultima analisi, portando a trattamenti migliori per varie malattie.
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Disclosures
Gli autori hanno dichiarato che non esistono conflitti di interesse concorrenti.
Acknowledgments
Si ringrazia il Dipartimento di Neurochirurgia del Secondo Ospedale Affiliato dell'Università di Medicina dell'Esercito per il supporto al sito. Finanziamento: Questo lavoro è stato sostenuto dalla Natural Science Foundation of China (82104696).
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 3D printing batch mice fixator | MESH INVENT | Custom made | The fixator produced by 3D printer. The printing method is called fused deposition modeling (FDM), also known as fused filament fabrication (FFF). |
| Electroacupuncture instrument | Hwato, Suzhou Medical Appliance Factory | SDZ-III | www.Hwato-med.com |
| Disposable sterile acupuncture needle | Suzhou Medical Appliance Factory | N/A | 0.25 mm x 13 mm |
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