In vivo Ca 2 + - Beeldvorming van Mushroom Body neuronen tijdens Olfactorische Leren in de Honey Bee
Summary
Bijen kunnen worden geconditioneerd in een appetitief olfactorische leren paradigma (PER-conditioning). Het gebruik van geuren als prikkels, hebben we een methode waarin het gedrag wordt vastgelegd, terwijl tegelijkertijd Calcium Imaging wordt gebruikt om de geur oproept activiteit te meten in champignon lichaam neuronen<em> In vivo</em>.
Abstract
De in vivo en semi-in vivo voorbereiding voor Calcium beeldvorming is ontwikkeld in ons laboratorium door Joerges, Kuttner en Galizia meer dan tien jaar geleden, aan geur opgeroepen activiteit te meten in de antennale lob 1. Vanaf dat moment is het voortdurend verfijnd en toegepast op verschillende neuropiles in de bij hersenen. We beschrijven hier de voorbereiding die momenteel worden gebruikt in het lab om de activiteit te meten in champignon lichaam neuronen met behulp van een dextran gekoppeld calcium-gevoelige kleurstof (Fura-2). We retrogradely vlek paddestoel lichaam neuronen door het injecteren van kleurstof in hun axonen of soma regio. Wij richten ons op het verminderen van de invasiviteit, om een voorbereiding waarin het nog steeds mogelijk om te trainen met behulp van de bij PER conditionering te bereiken. Wij zijn in staat om toezicht te houden en te kwantificeren de gedragsmatige respons door het opnemen van electro-myograms van de spier die de PER (M17) 2 controles.
Na de fysiologische experiment de verbeelde structuren worden onderzocht in meer detail met behulp van confocale scanning microscopie om de identiteit van de neuronen te pakken.
Protocol
Discussion
In deze presentatie hebben we doorlopen alle stappen om te onderzoeken in vivo calcium signalen in de honingbij. We pasten deze techniek paddestoel lichaam neuronen, maar beeldvorming kan worden gedaan op alle neuronen waarvoor een kleuring techniek kan worden vastgesteld. Hebben we ons gericht op de neuronen in de olfactorische route van de honingbij. De experimenten zijn uitgevoerd in een donkere kamer. De set up is verlicht met een lange golf licht dat uit leugens van de optische waarneming bereik van de hon…
Acknowledgements
Dit werk wordt gefinancierd door de DFG.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| low melting point hard wax Deiberit 502 | Dr. Böhme & Schöps Dental GmbH | |||
| FURA-2 dextran potassium salt, 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | F-3029 | Protect from light. | |
| tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | D-3312 | Protect from light. | |
| n-eicosane | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | ||
| Kwik Sil Adhesive | WPI | KWIK SIL | ||
| Imaging Set-up | TILL Photonics | |||
| CCD camera | Imago | |||
| CED | Texas Instruments |
References
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee’s proboscis reflex by electromyiographic recordings. J. Insect Physiol. 33, 501-507 (1987).
- Galizia, C. G., Vetter, R. S., Christensen, T. A. Optical Methods for Analyzing Odor-Evoked Activity in the Insect Brain. Methods in Insect Sensory Neuroscience. , 345-388 (2004).
- Mauelshagen, J. Neural correlates of olfactory learning paradigms in an identified neuron in the honeybee brain. J Neurophysiol. 69 (2), 609-625 (1993).
- Kuwabara, M. Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene Apis mellifica, Hokaido Univ. Zool. J. Sci. 13, 458-464 (1957).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera. Journal of Comparative Psychology. 97 (2), 107-119 (1983).
