생체내 칼슘 2 + - 허니 비에 강한 학습하는 동안 버섯 바디 뉴런의 영상
Summary
꿀벌은 appetitive 후각 학습 패러다임 (당 시설)에서 시설 수 있습니다. 자극과 같은 냄새를 사용하여, 우리는 동시에 칼슘 이미징이 버섯 신체 뉴런에서 냄새 evoked 활동을 측정하는 데 사용하는 동안 기록되는 행동 방식을 설립<em> 생체내에</em>.
Abstract
생체내 및 반에서 칼슘 이미징에 대한 생체내 준비가 Joerges, Küttner 및 Galizia에 의해 우리가 실험실에서 개발되었습니다의 이상 십년 전, antennal 엽 1 냄새 evoked 활동을 측정합니다. 그때부터, 그것은 지속적으로 세련되었고 비 두뇌에서 다른 neuropiles에 적용. 여기서 우리는 현재 dextran 결합 칼슘에 민감한 염료를 (Fura – 2)를 사용하여 버섯 신체 뉴런의 활동을 측정하기 위하여 실험실에서 사용되는 준비를 설명합니다. 우리는 retrogradely 자신의 axons 또는 소마 지역에 염료를 주입하여 버섯 신체 뉴런을 얼룩. 우리는 에어컨 PER 사용하여 꿀벌을 양성 볼 수 있습니다있는 준비를 달성하기 위해, invasiveness을 줄이는 데 중점을 둡니다. 우리는 PER (M17) 2를 제어하는 근육에서 전자 myograms을 기록하여 행동 반응을 모니터링하고 정할 수 있습니다.
생리 실험 후 몇 군데 구조는 뉴런의 신원을 주소로 공촛점 스캐닝 현미경을 사용하여보다 상세히 조사하고 있습니다.
Protocol
Discussion
이 프레 젠 테이션에서 우리는 꿀벌의 생체내 칼슘 신호에 조사하기위한 모든 단계를 통과했습니다. 우리는 버섯 몸의 신경이 기술을 적용하지만, 이미지는 얼룩 기술이 확립 수있는 모든 뉴런에서 할 수 있습니다. 우리는 벌꿀 꿀벌의 후각 경로의 뉴런에 주력했습니다. 실험은 모든 암실에서 수행됩니다. 세트는 최대 꿀벌의 광학 인식 범위 밖으로 거짓과 염료를 자극하지 않는 긴 …
Acknowledgements
이 작품은 DFG에 의해 자금입니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| low melting point hard wax Deiberit 502 | Dr. Böhme & Schöps Dental GmbH | |||
| FURA-2 dextran potassium salt, 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | F-3029 | Protect from light. | |
| tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | D-3312 | Protect from light. | |
| n-eicosane | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | ||
| Kwik Sil Adhesive | WPI | KWIK SIL | ||
| Imaging Set-up | TILL Photonics | |||
| CCD camera | Imago | |||
| CED | Texas Instruments |
References
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee’s proboscis reflex by electromyiographic recordings. J. Insect Physiol. 33, 501-507 (1987).
- Galizia, C. G., Vetter, R. S., Christensen, T. A. Optical Methods for Analyzing Odor-Evoked Activity in the Insect Brain. Methods in Insect Sensory Neuroscience. , 345-388 (2004).
- Mauelshagen, J. Neural correlates of olfactory learning paradigms in an identified neuron in the honeybee brain. J Neurophysiol. 69 (2), 609-625 (1993).
- Kuwabara, M. Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene Apis mellifica, Hokaido Univ. Zool. J. Sci. 13, 458-464 (1957).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera. Journal of Comparative Psychology. 97 (2), 107-119 (1983).
