In vivo Ca 2 + - avbildning av Svamp Body nervceller under Olfactory lära i Honey Bee
Summary
Bin kan konditioneras i en appetitive lukt lärande (per-konditionering). Använda lukter som stimuli, etablerade vi en metod där beteende är inspelade samtidigt Kalcium Imaging används för att mäta lukt framkallade aktivitet i svamp kroppens nervceller<em> In vivo</em>.
Abstract
In vivo-och semi-in vivo inför Kalcium avbildning har utvecklats i vårt labb med Joerges, Kuttner och Galizia över tio år sedan, för att mäta lukt framkallade aktivitet i antennal lob 1. Från och med då har det varit hela tiden förfinats och används på olika neuropiles i biet hjärnan. Här beskriver vi förberedelserna för närvarande används i labbet för att mäta aktiviteten i svamp kroppen nervceller med hjälp av en dextran kopplad kalcium-känsliga färgämne (Fura-2). Vi fläcken retrogradely svamp kroppens nervceller genom att injicera färg i sina axoner eller soma regionen. Vi fokuserar på att minska invasivitet att uppnå ett preparat där det fortfarande är möjligt att träna biet med PER konditionering. Vi har möjlighet att övervaka och mäta beteendemässiga svar genom att spela in elektro-myograms från den muskeln som styr PER (M17) 2.
Efter fysiologiska experimentet avbildade strukturer undersöks närmare med hjälp av konfokal scanning mikroskopi för att hantera identitet nervceller.
Protocol
Discussion
I denna presentation har vi gått igenom alla steg för att undersöka in vivo kalcium signaler i honungsbiet. Vi tillämpat denna teknik för att svamp kroppens nervceller, men bildbehandling kan göras på alla nervceller som en målningsteknik kan fastställas. Vi har fokuserat på nervceller i lukt väg av honungsbiet. Experimenten är alla utförs i ett mörkrum. Inrättandet belyses med en lång våg ljus som ligger utanför optiska uppfattningen räckvidd bee och inte uppväcka färgämnen. Det är vikti…
Acknowledgements
Detta arbete finansieras av DFG.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| low melting point hard wax Deiberit 502 | Dr. Böhme & Schöps Dental GmbH | |||
| FURA-2 dextran potassium salt, 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | F-3029 | Protect from light. | |
| tetramethylrhodamine dextran 10 000 MW | Invitrogen/Molecular Probes | D-3312 | Protect from light. | |
| n-eicosane | Sigma-Aldrich | 21, 927-4 | ||
| Kwik Sil Adhesive | WPI | KWIK SIL | ||
| Imaging Set-up | TILL Photonics | |||
| CCD camera | Imago | |||
| CED | Texas Instruments |
References
- Joerges, J., Küttner, A., Galizia, C. G., Menzel, R. Representations of odors and odor mixtures visualized in the honeybee brain. Nature. 387 (6630), 285-288 (1997).
- Rehder, V. Quantification of the honeybee’s proboscis reflex by electromyiographic recordings. J. Insect Physiol. 33, 501-507 (1987).
- Galizia, C. G., Vetter, R. S., Christensen, T. A. Optical Methods for Analyzing Odor-Evoked Activity in the Insect Brain. Methods in Insect Sensory Neuroscience. , 345-388 (2004).
- Mauelshagen, J. Neural correlates of olfactory learning paradigms in an identified neuron in the honeybee brain. J Neurophysiol. 69 (2), 609-625 (1993).
- Kuwabara, M. Bildung des bedingten Reflexes von Pavlovs Typus bei der Honigbiene Apis mellifica, Hokaido Univ. Zool. J. Sci. 13, 458-464 (1957).
- Bitterman, M. E., Menzel, R., Fietz, A., Schafer, S. Classical conditioning of proboscis extension in honeybees (Apis mellifera. Journal of Comparative Psychology. 97 (2), 107-119 (1983).
