הדיוק והרגישות של נחישות חלבון ידי assay ברדפורד מהירה ונוחה נפגעת על ידי הליניאריות מהותי. אנחנו מראים הליך לינאריזציה פשוט מגדיל מאוד את הדיוק, משפרת את הרגישות של assay על פי 10, וכן מפחית באופן משמעותי את ההפרעה באמצעות דטרגנטים.
Abstract
קביעת כמויות מיקרוגרם של חלבון ב assay Coomassie ברדפורד כחול מבריק נעשה על ידי מדידת ספיגת ב 590 ננומטר. זה assay הנפוצה ביותר מאפשרת כימות חלבון מהיר פשוט lysates תא, שברים הסלולר, או דגימות חלבון רקומביננטי, לצורך נורמליזציה מדידות ביוכימיות. עם זאת, הליניאריות מהותי פשרות את הרגישות ואת הדיוק של שיטה זו. זה הראו כי בתנאים assay סטנדרטי, יחס של מדידות ספיגת ב 590 ננומטר ו -450 ננומטר הוא ליניארי לחלוטין עם ריכוז חלבון. הליך זה פשוט מגדיל את הדיוק משפר את הרגישות של assay על כימות, של פי 10 המתיר עד 50 ננוגרם של אלבומין בסרום שור. יתר על כן, התערבות הציג כלל על ידי דטרגנטים, כי הם השתמשו כדי ליצור את התא lysates מופחת במידה ניכרת על ידי פרוטוקול חדש. משוואה ליניארית שפותחה על בסיס של פעולה המונית החוק של באר לגמרי תואם את נתוני הניסוי.
Protocol
לינאריזציה של גרף כיול חלבון ברדפורד: Assay החלבון מבריק Coomassie כחול, הידוע בכינויו assay ברדפורד 1, נעשה שימוש נרחב בגלל פרוטוקול מהיר ונוח שלה, כמו גם רגישות היחסי. למרבה הצער, יש מידה רבה של עקמומיות פני טווח רחב של ריכוזי חלבון (א?…
Discussion
Assay חלבון ברדפורד הוא פופולרי בשל קלות הביצוע רגישות יחסית. לינאריזציה על ריכוזי חלבון שלם טווח מתקבל על ידי פרוטוקול המובא כאן עוד מפשט את assay, כמו דגימות ידוע לא צריך ליפול בטווח של גרף הכיול.
חשוב לציין, את פרוטוקול שיפור נוסף מס…
Acknowledgements
מאמר זה מוקדש לזכרו של המנוח ד"ר צבי זלינגר, אשר אירח את המחקר המקורי המתואר כאן.