ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख के linearization
Summary
और तेजी से और सुविधाजनक ब्रैडफोर्ड परख द्वारा प्रोटीन दृढ़ संकल्प की सटीकता संवेदनशीलता आंतरिक nonlinearity से समझौता किया है. हम एक सरल linearization प्रक्रिया है कि बहुत सटीकता बढ़ जाती है, 10 गुना के बारे में परख की संवेदनशीलता में सुधार है, और काफी डिटर्जेंट द्वारा हस्तक्षेप कम कर देता है दिखाते हैं.
Abstract
माइक्रोग्राम ब्रैडफोर्ड Coomassie शानदार नीले परख में प्रोटीन की मात्रा का निर्धारण absorbance के 590 एनएम पर माप के द्वारा पूरा किया है. यह सबसे आम परख जैव रासायनिक माप के सामान्यीकरण के प्रयोजन के लिए तेजी से और सरल सेल lysates, सेलुलर भिन्न, या पुनः संयोजक प्रोटीन के नमूने में प्रोटीन की मात्रा का ठहराव, सक्षम बनाता है. हालांकि, एक आंतरिक nonlinearity और इस विधि की संवेदनशीलता और सटीकता समझौता. यह दिखाया गया है कि मानक परख की शर्तों के तहत, 590 एनएम पर absorbance के मापन और 450 एनएम के अनुपात प्रोटीन एकाग्रता के साथ कड़ाई से रैखिक है. इस सरल प्रक्रिया सटीकता बढ़ जाती है और 10 गुना, अनुमति गोजातीय सीरम albumin 50 एनजी नीचे मात्रा का ठहराव के बारे में परख की संवेदनशीलता को बेहतर बनाता है. इसके अलावा, आमतौर पर डिटर्जेंट कि सेल lysates बनाने के लिए उपयोग किया जाता है के द्वारा शुरू हस्तक्षेप बहुत नया प्रोटोकॉल से कम है. एक बड़े पैमाने पर कार्रवाई और बीयर कानून के आधार पर विकसित रेखीय समीकरण पूरी तरह से प्रयोगात्मक डेटा फिट बैठता है.
Protocol
Discussion
ब्रैडफोर्ड प्रोटीन परख प्रदर्शन और रिश्तेदार संवेदनशीलता के अपने आसानी के कारण लोकप्रिय है. प्रोटोकॉल द्वारा प्राप्त रेंज पूरे प्रोटीन सांद्रता में linearization प्रस्तुत यहाँ आगे परख सरल है, के रूप में अज्?…
Acknowledgements
यह कागज देर से डा. ZVI Selinger, जो मूल यहाँ वर्णित अनुसंधान की मेजबानी की स्मृति को समर्पित है.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Bradford reagent | Bio-Rad Laboratories | 500-0006 | ||
| Bovine Serum Albumin | Amersco | 0332 | ||
| Multiplate absorbance reader | BioTek | Synergy2 |
References
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