Agarmontering: En grundläggande metod för montering av levande zebrafiskembryon för långsiktig avbildning

Abstract

Källa: Hagedorn E. J., m.fl. Generation av parabiotiska zebrafiskembryon genom kirurgisk fusion av utveckla blastulae. J. Vis. Exp. (2016).

Denna video beskriver steg för steg instruktioner om montering av levande zebrafisk embryon på 6 väl tallrik med låg smält agarose. Det ger också processen att förvärva bilder av levande embryon och analysera det med hjälp av programvara.

Protocol

1. Mikroskopinstallation, bildförvärv, bearbetning och analys Förbered 0,8 % låg smältpunkt (LMP) agarosa: Tillsätt 0,8 g LMP-agarosa till 100 ml E3 och värm tills den är helt upplöst. Medan det är varmt, alikvot 1 ml LMP-agarosa i 1,5 ml mikrofugerör i ett 37 °C värmeblock. LMP-agarosen förblir smält vid 37 °C. Tillsätt 40 μl 4 mg/ml (25x), pH 7,0 trikain till varje 1 ml alikvot LMP-agarosa vid 37 °C. OBS: Om du arbetar med en pigmenterad stam, tillsätt 20…

Materials

LMP agarose (Ultrapure LMP agarose)	Invitrogen	16520100
Tricaine (powder) (Tricaine Methanesulfonato, Tricaine-S)	Western Chemical Inc	MS 222
Glass-bottom 6-well plates used for imaging	MatTek	P06G1.5-20-F
10 ml pipette pump (green) (Pipette Pump Pipettor)	Novatech International	F37898-0000