In Utero intraventrikuläre Injektion und Elektroporation von E15 muriner Embryonen

Abstract

In-utero in-vivo-Injektion und Elektroporation von embryonalen Maus Neocortex ist ein leistungsstarkes Tool für die Manipulation von einzelnen Vorfahren an den Wänden der Seitenventrikel. Diese Technik ist mittlerweile weit verbreitet, um die Prozesse in Kortikogenese durch Überexpression oder umzuwerfen Gene und beobachten die Auswirkungen auf die zelluläre Proliferation, Migration und Differenzierung beteiligt zu studieren. Im Vergleich zu traditionellen Ko-Strategien, bietet in-utero Elektroporation eine schnelle Mittel, um eine Population von Zellen in einem bestimmten Zeitfenster zu manipulieren. In diesem Video-Protokoll beschreiben wir die experimentelle Methodik zur Vorbereitung Mäuse für Chirurgie, Freilegung der Uterushörner durch laporatomy, Injektion von DNA in die Seitenventrikel des sich entwickelnden Embryos, Elektroporation von DNA in den Vorläuferzellen entlang der Seitenwand und Pflege von Tieren nach der Operation . Unser Labor nutzt dieses Protokoll für Operationen auf E13-E16-Mäuse, ist es jedoch am häufigsten bei E15 durchgeführt, wie in diesem Video gezeigt.