In Utero iniezione intraventricolare e Elettroporazione di E15 embrioni di topo

Abstract

In utero in vivo iniezione ed elettroporazione della neocorteccia embrionali di topo fornisce un potente strumento per la manipolazione di singoli progenitori che ricoprono le pareti del ventricolo laterale. Questa tecnica è ormai ampiamente utilizzata per studiare i processi coinvolti nella corticogenesis da sovra-espressione o abbattere i geni e osservando gli effetti sulla proliferazione cellulare, la migrazione e differenziazione. Rispetto alle tradizionali strategie di eliminazione diretta, in utero elettroporazione fornisce un mezzo rapido per manipolare una popolazione di cellule durante una specifica finestra temporale. In questo protocollo video descritta la metodologia sperimentale per la preparazione di topi per la chirurgia, esponendo le corna uterine attraverso laporatomy, iniettando il DNA nei ventricoli laterali dell'embrione in via di sviluppo electroporating DNA nel progenitori rivestimento della parete laterale, e la cura per gli animali post-operatorio . Il nostro laboratorio utilizza questo protocollo per interventi chirurgici sulla E13-E16 topi, tuttavia, è più comunemente eseguita a E15, come mostrato in questo video.