Summary

整个肝脏的脱细胞和Recellularization

Published: February 04, 2011
doi:

Summary

灌注脱细胞是一种新型的的技术来生产全肝支架,保留器官的细胞外基质成分和微。在这里,准备灌注脱细胞与肝细胞和后续复育的整个器官支架的方法描述。使用这种技术,可以生成功能和移植肝移植。

Abstract

肝脏是一个复杂的器官,这就需要不断提供营养和氧气和废物清除灌注为了生存 1 。努力重建或模仿肝脏显微结构与向上的方法,利用组织工程和微细加工技术的理由都没有成功至今,由于这一设计挑战。此外,用于创建为肝组织工程中的应用支架的合成生物材料由于缺乏特定的细胞结合的图案,将促使正常的细胞功能2,在诱导组织再生和修复在很大程度上受到了限制。脱细胞原生组织,如血管3和皮肤4另一方面发现在组织工程中的许多应用,并提供了一个切实可行的解决办法的一些挑战。脱细胞原生基质的优点是,它保留了,在一定程度上,原来的组成和微观结构,从而增强细胞附着重组5。

在这项工作中,我们描述的方法来执行灌注脱细胞的肝脏,这样一个完整的肝bioscaffold保留主要血管的结构得到。此外,我们描述recellularize与成人原发性肝细胞的这些bioscaffolds,创造了肝移植,体外功能的方法,和体内移植所需的船只。

Protocol

1。肝脱细胞大鼠肝门静脉插管和18号导尿管收获。让劣势和上腔静脉开放。器官的水分保持在磷酸盐缓冲生理盐水(PBS)的一个10厘米的培养皿中。 设置灌注系统,包含8升水库,蠕动泵和泡沫陷阱。 填写灌注系统,用磷酸盐缓冲液,保持10分钟运行。填写成10厘米的培养皿中的PBS和减少流量的磷酸盐缓冲生理盐水1毫升/分钟。 仔细收获肝脏转移到磷酸盐缓冲生理盐水?…

Discussion

这里描述灌注脱细胞方法产生一个全肝支架具有相同的总体结构和原生肝血管微架构。支架有一个类似的原生的肝细胞外基质组成。 recellularization方法实现高效率和细胞的细胞仍然在测试期间在体外培养可行和功能的支架复育。到recellularized移植肝非实质细胞此外,我们设想,可作为一个平台,用于研究药物代谢,再生和发展,如各种肝功能的recellularized肝移植。此外,可能会发现recellulariz…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

作者想感谢杰克Milwid的体外灌注腔设计。这项工作是由来自美国国立卫生研究院,R01DK59766和R01DK084053授予我,R00DK080942 KU,美国国家科学基金会CBET – 0853569 KU和施赖纳斯BEU儿童医院(批准号:8503)的支持。我们也承认支持和施赖纳斯儿童医院。

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Sodium dodecyl sulfate   Sigma-Aldrich L4390  
Triton X-100   Sigma-Aldrich T8787  
Masterflex L/S Digital Drive   Cole-Parmer EW-07523-80  
Masterflex L/S Standard pump head   Cole-Parmer EW- 07013-81  
Bubble trap   Radnoti 130149  

References

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Cite This Article
Uygun, B. E., Price, G., Saeidi, N., Izamis, M., Berendsen, T., Yarmush, M., Uygun, K. Decellularization and Recellularization of Whole Livers. J. Vis. Exp. (48), e2394, doi:10.3791/2394 (2011).

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