Decellularization и Recellularization Целых Печень
Summary
Перфузии decellularization это новый метод для получения целого леса печень, которая сохраняет внеклеточного матрикса органа состав и микроархитектуры. При этом, способ приготовления целого леса орган использованием decellularization перфузии и последующим репопуляции с гепатоцитов описывается. Функциональные и трансплантации печени трансплантаты могут быть получены с помощью этой техники.
Abstract
Печень сложный орган, который требует постоянной перфузии для доставки питательных веществ и кислорода и удаления отходов, чтобы выжить 1. Усилия, направленные на воссоздание или имитировать печени микроструктуры с основания до подхода с использованием тканевой инженерии и микротехнологий методы не увенчались успехом до сих пор из-за этой конструкции задача. Кроме того, синтетические биоматериалы для создания лесов для печени приложений тканевой инженерии были ограничены в индукции регенерации тканей и ремонт в значительной степени из-за отсутствия конкретной ячейке связывающие мотивы, которые будут обеспечивать надлежащее клеточных функций 2. Decellularized родной ткани, такие сосуды 3 и кожи 4, с другой стороны нашли много применений в тканевой инженерии, а также оказывали практическое решение некоторых проблем. Преимущество decellularized родной матрицы является то, что он сохраняет в определенной степени, оригинальные композиции и микроструктуры, следовательно, повышения вложений клеток и реорганизация 5.
В этой работе мы описываем методы для выполнения перфузии-decellularization печени, такие, что интактной печени bioscaffold, который сохраняет структуру крупных кровеносных сосудов получается. Далее мы опишем методы recellularize этих bioscaffolds взрослых первичных гепатоцитах, создания трансплантата печени, что является функциональным в пробирке, и судно доступ к необходимым для трансплантации в естественных условиях.
Protocol
Discussion
Метод перфузии decellularization описанные здесь производит целую печень эшафот с тем же валовой структуры и сосудистой микроархитектуры родной печени. Эшафот имеет внеклеточной матрицы составу похож на родной печени. Recellularization метода достигает репопуляции строительных лесов с клетками при …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Авторы хотели бы поблагодарить Джек Milwid для проектирования в камере перфузии пробирке. Эта работа была поддержана грантами из США NIH, R01DK59766 и R01DK084053 к М.Ю., R00DK080942 к КУ, США NSF конбет-0853569 в КУ и Shriners больницы для детей в БЭУ (грант №. 8503). Мы также признаем, поддержку и Shriners больницы для детей.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma-Aldrich | L4390 | ||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | ||
| Masterflex L/S Digital Drive | Cole-Parmer | EW-07523-80 | ||
| Masterflex L/S Standard pump head | Cole-Parmer | EW- 07013-81 | ||
| Bubble trap | Radnoti | 130149 |
References
- Kulig, K. M., Vacanti, J. P. Hepatic tissue engineering. Transpl Immunol. 12, 303-310 (2004).
- Lutolf, M. P., Hubbell, J. A. Synthetic biomaterials as instructive extracellular microenvironments for morphogenesis in tissue engineering. Nature biotechnology. 23, 47-55 (2005).
- Dahl, S. L., Koh, J., Prabhakar, V., Niklason, L. E. Decellularized native and engineered arterial scaffolds for transplantation. Cell Transplant. 12, 659-666 (2003).
- Schechner, J. S. Engraftment of a vascularized human skin equivalent. FASEB J. 17, 2250-2256 (2003).
- Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F., F, S. Decellularization of tissues and organs. Biomaterials. 27, 3675-3683 (2006).
- Uygun, B. E. Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. Nat Med. , (2010).
