Descelularización y recelularización de hígados enteros
Summary
Descelularización perfusión es una técnica novedosa para producir andamios todo hepática que conserva la composición del órgano de la matriz extracelular y la microarquitectura. Aquí, el método de preparación de andamios todo órgano con descelularización perfusión y posterior repoblación con hepatocitos se describe. Los injertos de hígado funcionales y trasplantables se pueden generar con esta técnica.
Abstract
El hígado es un órgano complejo que requiere una perfusión constante para el suministro de nutrientes y oxígeno y la eliminación de los residuos con el fin de sobrevivir a una. Los esfuerzos para recrear o simular la microestructura del hígado con motivos up approach utilizando ingeniería de tejidos y técnicas de microfabricación no han tenido éxito hasta ahora debido a este reto de diseño. Además, los biomateriales sintéticos usados para crear los andamios para aplicaciones de ingeniería de los tejidos del hígado se han limitado en la inducción de la regeneración y reparación de tejidos en gran parte debido a la falta de motivos de células específicas de unión que podría inducir a las funciones de las células adecuadas 2. Descelularizada tejidos nativos como los vasos sanguíneos y la piel 3 4 en el otro lado se han encontrado muchas aplicaciones en la ingeniería de tejidos, y han proporcionado una solución práctica a algunos de los desafíos. La ventaja de la matriz descelularizada nativos es que conserva, en cierta medida, la composición original, y la microestructura, por lo tanto, la mejora de la adhesión celular y la reorganización 5.
En este trabajo se describen los métodos para realizar la perfusión-descelularización del hígado, de tal manera que un hígado intacto bioscaffold que conserva la estructura de los vasos sanguíneos principales se obtiene. Además, se describen los métodos para recellularize estas matrices biodegradables para adultos con hepatocitos primarios, la creación de un injerto de hígado que es funcional in vitro, y tiene el acceso de los buques necesarios para el trasplante de vivo.
Protocol
Discussion
El método descrito aquí descelularización perfusión produce un conjunto de andamios que el hígado tiene la misma estructura bruta y la microarquitectura vascular del hígado nativo. El andamio tiene una composición de la matriz extracelular similar a la del hígado nativo. El método recelularización logra la repoblación de los andamios con células de alta eficiencia y las células permanecen viables y funcionales durante el período de cultivo in vitro de la prueba. Con la adición de las cé…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Los autores desean agradecer a Jack Milwid para el diseño de la cámara de perfusión en vitro. Este trabajo fue apoyado por becas de los NIH de EE.UU., y R01DK59766 R01DK084053 a mi, R00DK080942 de KU, EE.UU. NSF CBET-0853569 de KU y los Hospitales Shriners para niños de BEU (concesión no. 8.503). También reconocemos el apoyo y los Hospitales Shriners para niños.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma-Aldrich | L4390 | ||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | ||
| Masterflex L/S Digital Drive | Cole-Parmer | EW-07523-80 | ||
| Masterflex L/S Standard pump head | Cole-Parmer | EW- 07013-81 | ||
| Bubble trap | Radnoti | 130149 |
References
- Kulig, K. M., Vacanti, J. P. Hepatic tissue engineering. Transpl Immunol. 12, 303-310 (2004).
- Lutolf, M. P., Hubbell, J. A. Synthetic biomaterials as instructive extracellular microenvironments for morphogenesis in tissue engineering. Nature biotechnology. 23, 47-55 (2005).
- Dahl, S. L., Koh, J., Prabhakar, V., Niklason, L. E. Decellularized native and engineered arterial scaffolds for transplantation. Cell Transplant. 12, 659-666 (2003).
- Schechner, J. S. Engraftment of a vascularized human skin equivalent. FASEB J. 17, 2250-2256 (2003).
- Gilbert, T. W., Sellaro, T. L., Badylak, S. F., F, S. Decellularization of tissues and organs. Biomaterials. 27, 3675-3683 (2006).
- Uygun, B. E. Organ reengineering through development of a transplantable recellularized liver graft using decellularized liver matrix. Nat Med. , (2010).
