Décellularisation et Recellularization des foies entiers
Summary
Décellularisation perfusion est une nouvelle technique pour produire des échafaudages foie entier qui conserve la composition de l'organe de la matrice extracellulaire et la microarchitecture. Ici, la méthode de préparation d'échafaudages organe entier en utilisant décellularisation perfusion et le repeuplement ultérieur avec les hépatocytes est décrite. Greffes de foie fonctionnel et transplantables peuvent être générés en utilisant cette technique.
Abstract
Le foie est un organe complexe qui nécessite une perfusion constante pour la livraison de nutriments et d'oxygène et l'élimination des déchets afin de survivre à 1. Les efforts pour recréer ou imitent la microstructure du foie avec des motifs en utilisant l'approche de l'ingénierie tissulaire et des techniques de microfabrication n'ont pas réussi jusqu'à présent à cause de ce défi de conception. En outre, les biomatériaux synthétiques utilisés pour créer des échafaudages pour les applications de l'ingénierie tissulaire du foie ont été limitées dans l'induction de la régénération des tissus et la réparation due en grande partie à l'absence de motifs de cellule de liaison spécifique qui induisent les fonctions cellulaires appropriées 2. Tissus décellularisé natif vaisseaux sanguins et la peau tels 3 4 d'autre part ont trouvé de nombreuses applications en ingénierie tissulaire, et ont fourni une solution pratique à certains des défis. L'avantage de la matrice maternelle décellularisé est qu'il conserve, dans une certaine mesure, la composition originale, et la microstructure, et donc l'amélioration de la fixation des cellules et la réorganisation 5.
Dans ce travail, nous décrivons les méthodes pour effectuer la perfusion-décellularisation du foie, tels qu'un foie intact bioscaffold qui conserve la structure des vaisseaux sanguins majeurs est obtenu. En outre, nous décrivons des méthodes pour recellularize ces biomatériaux avec un adulte hépatocytes primaires, la création d'une greffe du foie qui est fonctionnel in vitro, et a l'accès du navire nécessaires pour la transplantation in vivo.
Protocol
Discussion
La méthode décrite ici décellularisation perfusion produit un foie entier d'échafaudage qui a la même structure brute et la microarchitecture vasculaires du foie natif. L'échafaud est une composition de la matrice extracellulaire semblable à du foie natif. La méthode recellularization réalise repeuplement de l'échafaud avec des cellules à haut rendement et les cellules restent viables et fonctionnelles pendant la période de culture in vitro testées. Avec l'ajout de cellules…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier Jack Milwid pour la conception de la perfusion in vitro dans la chambre. Ce travail a été soutenu par des subventions du NIH américain, R01DK59766 et R01DK084053 à MY, R00DK080942 au KU, US NSF CBET-0853569 au KU et les Hôpitaux Shriners pour enfants au BEU (subvention aucune. 8503). Nous reconnaissons aussi le soutien et les Hôpitaux Shriners pour enfants.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium dodecyl sulfate | Sigma-Aldrich | L4390 | ||
| Triton X-100 | Sigma-Aldrich | T8787 | ||
| Masterflex L/S Digital Drive | Cole-Parmer | EW-07523-80 | ||
| Masterflex L/S Standard pump head | Cole-Parmer | EW- 07013-81 | ||
| Bubble trap | Radnoti | 130149 |
References
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