समर्थक भड़काऊ cytokine आईएल - 1β के सटीक और सरल मापन एक पूरे रक्त उत्तेजना परख का उपयोग
Summary
हम समर्थक भड़काऊ साइटोकिन्स के उत्पादन, आईएल -1 बीटा उत्पादन जैसे autoinflammatory phenotypes के साथ पेश रोगियों में, को मापने के लिए एक सरल immunoassay का वर्णन. रोगज़नक़ जुड़े lipopolysaccharide के साथ विशेष रूप से आणविक पैटर्न के साथ पूरे रक्त संस्कृतियों में कोशिकाओं को सक्रिय करके, cytokine स्राव सुविधा पूरे रक्त supernatants में मूल्यांकन किया जा सकता है.
Abstract
सूजन प्रतिरक्षा कोशिकाओं द्वारा घुलनशील मध्यस्थों के स्राव से उत्पन्न प्रक्रियाओं, त्वचा, जोड़ों और अन्य ऊतकों के रूप में के रूप में अच्छी तरह से बदल साइटोकाइन homeostasis में विभिन्न अभिव्यक्तियों के लिए नेतृत्व. सहज प्रतिरक्षा प्रणाली रोगज़नक़ों और अन्य अंतर्जात खतरे उत्तेजनाओं को पहचानने में एक महत्वपूर्ण भूमिका निभाता है. प्रमुख सहज प्रतिरक्षा कोशिकाओं द्वारा जारी साइटोकिन्स के इंटरल्युकिन -1 (आईएल) है. इसलिए, हम एक पूरे रक्त उत्तेजना परख का उपयोग क्रम में भड़काऊ साइटोकिन्स के स्राव को मापने के लिए और विशेष रूप से समर्थक भड़काऊ cytokine 1 आईएल 1β, 2, 3.
सहज प्रतिरक्षा प्रणाली के autoinflammatory सिंड्रोम के कारण आनुवंशिक रोग के साथ मरीजों को परिपक्व LPS के साथ अकेले उत्तेजना पर आईएल 1β के एक अतिरंजित रिलीज दिखा. आदेश में जो भड़काऊ जुड़े विकृतियों के साथ उपस्थित रोगियों की सहज प्रतिरक्षा घटक का मूल्यांकन करने के लिए, हम एक विशिष्ट रोगज़नक़ जुड़े आणविक (PAMPs) ग्राम नकारात्मक बैक्टीरियल endotoxin जैसे पैटर्न, के लिए सेलुलर प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया का पता लगाने immunoassay lipopolysaccharide (LPS का उपयोग ). ये PAMPs रोगज़नक़ मान्यता (PRRs) रिसेप्टर्स, जो सहज प्रतिरक्षा प्रणाली 4, 5, 6, 7 की कोशिकाओं पर पाया जाता है के द्वारा मान्यता प्राप्त हैं. एक प्राथमिक संकेत है, एक माध्यमिक संकेत, एटीपी, inflammasome के सक्रियण एक multiprotein जटिल है कि अपने परिपक्व, bioactive 4 फार्म, 5, 6, 8, 9 समर्थक आईएल 1β प्रक्रियाओं के लिए आवश्यक है के साथ संयोजन के रूप में LPS, 10.
पूरे रक्त परख न्यूनतम नमूना हेरफेर की आवश्यकता है cytokine उत्पादन का आकलन करने के लिए जब अन्य विधियों है कि श्रम गहन और विशिष्ट सेल आबादियों के अलगाव संवर्धन की आवश्यकता की तुलना में. इस विधि अन्य पूरे रक्त उत्तेजना assays से अलग है, RPMI मीडिया का एक अनुपात के साथ नमूने गिराए बजाय, हम एक सफेद रक्त कोशिका प्रदर्शन पतला पूरे रक्त से सीधे गिनती और इसलिए, 2 संस्कृति में एक सफेद रक्त कोशिकाओं के ज्ञात संख्या को प्रोत्साहित. यह विशेष रूप से पूरे रक्त परख के परिणाम एक उपन्यास autoinflammatory pathophysiologies के साथ पेश रोगी साथियों elucidating में उपयोगी तकनीक का प्रदर्शन.
Protocol
Discussion
पूरे रक्त परख वर्णित एक सरल तरीका है कि और अधिक बारीकी से जब अन्य तकनीक है कि सेल अलगाव और व्यापक नमूना प्रसंस्करण और हेरफेर की आवश्यकता होगी की तुलना में शारीरिक स्थितियों mimics है. इस विधि ए ओ के साथ Cellometer व…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
इस शोध गठिया और राष्ट्रीय स्वास्थ्य संस्थान के के Musculoskeletal और त्वचा रोग के राष्ट्रीय संस्थान के अंदर का रिसर्च प्रोग्राम द्वारा समर्थित किया गया था.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Sodium Heparin Blood Collection Tubes | BD | 366480 | ||
| RPMI 1640 Media | GIBCO | 21870-100 | ||
| Acridine Orange | Invitrogen | A3568 | ||
| Cellometer Vision | Nexcelom Bioscience | Contact company for instrument information | ||
| Cellometer Cell Counting Chambers | Nexcelom Bioscience | CHT4-SD100 | ||
| 24-well Tissue Culture Plate | Corning Costar | 3524 | ||
| Ultra Pure E. coli K12 LPS | InvivoGen | tlrl-eklps | ||
| Adenosine 5´-tripohasphate disodium salt hydrate | Sigma-Aldrich | A26209 | ||
| Bio-plex 200 system | Bio-Rad | Contact company for instrument information | ||
| Bio-Plex Pro human cytokine x-plex assay | Bio-Rad | x-plex assays are custom made according to specified cytokines of interest |
References
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