フローサイトメトリーによる肺および肺リンパ節の分析とマウスの非外科的気管内注入
Summary
我々は気管を経由して麻酔したマウスの肺に試験物質の非外科的配信を示しています。このメソッドは、肺の細菌やウイルス性病原体への曝露、サイトカイン、抗体、ビーズ、化学物質、または染料を許可します。我々は、さらにフローサイトメトリーのために肺および肺リンパ節（LDLNs）の収穫と処理を説明します。
Abstract
このような肺胞マクロファージや肺樹状細胞（後発開発途上国）などの貪食細胞が継続的に肺の肺胞腔からの抗原をサンプリング。後発開発途上国（LDCs）は、特に、肺所属リンパ節（LDLNs）彼らは免疫原1,2の様々な適切な免疫応答を開始するT細胞に吸入抗原を提示場所。に移行することが知られていますマウスの肺と空気中の抗原との間のモデルの相互作用に、抗原は気管内に5またはエアロゾル6など、鼻腔内に1,3,4に投与することができる。それぞれの経路による配送は別個の技術的スキルと実験を設計する前に考慮する必要があるの制限を伴います。例えば、鼻腔とエアロゾルの暴露は、肺や上気道の両方に抗原を提供します。したがって、抗原は、潜在的に結果の解釈を複雑にして、鼻関連リンパ組織（NALT）7にアクセスできます。さらに、嚥下、くしゃみやマウスの呼吸数も納入線量の不整合が生じる可能性があります。上気道の関与がいくつかの研究のために好まれるかもしれませんが、それは特に肺に開始されたイベントを中心に実験を複雑にすることができます。それは直接肺に試験材料を提供し、NALTをバイパスするため、この設定では、気管内（IT）ルートが望ましい。多くのIT注入プロトコルでは、口腔や肺にアクセスするために気管の外科的暴露による気管のどちらかのブラインド挿管を伴う。ここで、我々はそれを点眼するためのシンプルで一貫性のある、非外科的方法を説明します。気管の開口部は、喉頭鏡を用いて可視化されており、曲げ胃管針は、innoculumを提供するために気管に直接挿入されます。我々はまた、フローサイトメトリーにより抗原の人身売買の分析のためにLDLNsと肺の収穫と処理を行うための手順について説明します。
Protocol
Discussion
我々は、肺からLDLNsに炭疽菌の胞子の人身売買を研究するためにこのプロトコルを利用してきた。同様のアプリケーションの場合は、肺に送達粒子の数を慎重に注入材をフローサイトメトリーによってLDLNsで検出することができるように選択する必要があります。我々はまた、正常細胞と蛍光標識抗体を使用して、特定の肺の細胞集団のラベリングの養子移入のためにこのメソッドを使…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
|---|---|---|---|
| 70μm Cell stariner | BD | ||
| Aniline Blue | Fisher | A967-25 | |
| Animal Feeding needle | Popper and Sons Inc | 7920 | |
| Collagenase | Sigma | C2139 | |
| Collagenase TypeIV | Worthington | ||
| Collagenase D | Roche | 11088974103 | |
| DPBS | Invitrogen | 14190 | |
| Fluoresbrite YG Microspheres (0.5μm) | Polysciences, Inc | 17152 | |
| HBSS without Calcium chloride and magnesium chloride | Invitrogen | 14170 | |
| Ketamine HCl (100mg/ml) | Hospira Inc | ||
| Laryngoscope Blade | PennCentury, Inc | For Model LS-1 | Refer to www.penncentury.com |
| Lightweight Fiber Optic Laryngoscope | WelchAllyn | 80814 | |
| Red Fluorescent Beads (0.5μm) | Invitrogen | F8812 | For i.p injection |
| Xylazine (100mg/ml) | Lloyd Laboratories |
References
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