को murine सतही लिम्फ नोड सर्जरी
Summary
एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया के ही माउस भीतर समय के साथ प्रगति का पालन करने के लिए, लिम्फ नोड्स sequentially सर्जरी द्वारा हटाया जा सकता है. यहाँ, हम वर्णन कैसे इस तकनीक का प्रदर्शन किया जा सकता है.
Abstract
इम्मुनोलोगि के क्षेत्र में, एक टीका, एक संक्रमण या एक ट्यूमर के खिलाफ एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया की प्रगति को समझने में, प्रतिक्रिया अक्सर समय के साथ पीछा किया जाता है. इसी तरह, लिम्फोसाइट homeostasis के अध्ययन पाठ्यक्रम प्रयोगों की आवश्यकता है. एक ही माउस के भीतर इन अध्ययनों प्रदर्शन प्रयोगात्मक रूप में अच्छी तरह के रूप में इस्तेमाल चूहों की संख्या परिवर्तनशीलता को कम करने के लिए आदर्श है. रक्त वापसी समय पाठ्यक्रम प्रयोगों के प्रदर्शन की अनुमति देता है, लेकिन यह ही लिम्फोसाइटों परिसंचारी के बारे में जानकारी देता है और 1-4 कक्षों की एक सीमित संख्या प्रदान करता है. के बाद से शरीर के माध्यम से परिसंचारी और लिम्फ नोड्स में रहने लिम्फोसाइटों अलग गुण है, यह महत्वपूर्ण है दोनों स्थानों की जांच की. अनुक्रमिक हटाने सर्जरी द्वारा लिम्फ नोड्स के एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया या समय पर एक ही माउस में प्रतिरक्षा सेल विस्तार का पालन करने के लिए एक अनूठा अवसर प्रदान करता है. इसके अलावा, इस तकनीक 1 – 2×10 लिम्फ नोड 6 प्रतिशत कोशिकाओं के बीच पैदावार जो पे के लिए पर्याप्त हैप्ररूपी लक्षण वर्णन और / या कार्यात्मक assays rform. अनुक्रमिक लसीका नोड सर्जरी या lymphadenectomy सफलतापूर्वक किया गया है हमारे और दूसरों के 5-11 के द्वारा प्रयोग किया जाता है. यहाँ, हम वर्णन कैसे बाहु और वंक्षण लिम्फ नोड्स एक anesthetised माउस की त्वचा में एक छोटा सा चीरा द्वारा हटाया जा सकता है. के बाद सर्जरी सतही और तेजी से किया है, माउस बहुत जल्दी ठीक है, अच्छी तरह से भर देता है और अत्यधिक दर्द का अनुभव नहीं है. हर दूसरे दिन, यह संभव है फसल एक या दो लिम्फ नोड्स समय बेशक प्रयोगों के लिए अनुमति देता है. इस तकनीक को इस तरह समय के साथ लसीका नोड की विशेषताओं रहने लिम्फोसाइटों का अध्ययन करने के लिए उपयुक्त है. इस दृष्टिकोण के विभिन्न प्रयोगात्मक डिजाइन के लिए उपयुक्त है और हम मानते हैं कि कई प्रयोगशालाओं अनुक्रमिक लसीका नोड सर्जरी के प्रदर्शन से लाभ होगा.
Protocol
Discussion
हम एलएन सर्जरी के एक प्रोटोकॉल है जो कई प्रयोगात्मक सिस्टम को लागू कर सकते हैं वर्णन किया है. हालांकि बहुत उपयोगी प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया या प्रतिरक्षा सेल homeostasis को पालन करने के लिए, इस तकनीक के कुछ सीमा?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
हम Sylvie Lesage और प्रोटोकॉल के महत्वपूर्ण पढ़ने के लिए सभी प्रयोगशाला के सदस्यों को धन्यवाद देता हूं. इस काम के स्वास्थ्य अनुसंधान (CIHR) की कनाडा के संस्थानों से एक अनुदान (एमओपी 77,545) द्वारा समर्थित किया गया. नथाली Labrecque एक FRSQ वरिष्ठ छात्रवृत्ति के द्वारा समर्थित है और मेलिस्सा मैथ्यू एक NSERC अलेक्जेंडर ग्राहम बेल कनाडा ग्रेजुएट छात्रवृत्ति प्राप्त.
Materials
| Reagent Name | Company | Catalog number | Comments |
| Graefe Fine Pattern Premium Forceps | Harvard Apparatus | 52-2144 | Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip |
| Michel Clip Applying and Removing Forceps | Harvard Apparatus | 52-3779 | 12.5 cm (5 in) |
| Michel Clip 100 | Harvard Apparatus | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
| Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Schering-Plough | ||
| Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
| Rompun (Xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
| Isoflurane | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
| Hypotears eye ointment | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
| Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |
References
- Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
- Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
- Zhou, X. Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1. Immunity. 33, 229-240 (2010).
- Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes. J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).
- Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses. Immunity. 7, 123-134 (1997).
- Witherden, D. Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules. J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).
- Labrecque, N. How much TCR does a T cell need. Immunity. 15, 71-82 (2001).
- Leignadier, J., Labrecque, N. Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation. PLoS One. 5, e13740 (2010).
- Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).
- Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response. J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).
- Bassett, J. D. CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells. Blood. 117, 1146-1155 (2011).
- Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization. J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).
- Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation. Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).
