Mürin Yüzeysel lenf nodu Cerrahisi
Summary
Aynı fare zaman içinde bir bağışıklık yanıtı ilerlemesini takip etmek, lenf düğümleri sırayla ameliyatla çıkarılabilir. Burada, bu teknik gerçekleştirilebilir açıklanmıştır.
Abstract
Bir aşı, bir enfeksiyon veya tümöre karşı bir bağışıklık cevabı ilerlemesini anlamak için immünoloji alanı içinde, yanıt zaman içinde takip eder. Benzer şekilde, lenfosit homeostazı çalışma süresi Elbette deney gerektirir. Aynı fare olan bu çalışmaların gerçekleştirme deney değişkenlik de kullanılan farelerin sayısını azaltmak için uygundur. Kan çekilme zamanı tabii deneyler performans sağlar, ancak yalnızca lenfositler dolaşım hakkında bilgi verir ve hücre 1-4 sınırlı sayıda sağlar. Vücut içinde dolaşan ve lenf bezlerinde bulunan lenfosit farklı özelliklere sahip olduğundan, her iki bölgede incelemek önemlidir. Cerrahi ile lenf nodlarının çıkarılması sıralı bir bağışıklık tepkisi veya zaman içinde aynı fare immün hücre genişleme takip eşsiz bir fırsat sunuyor. Dahası, bu teknik PE için yeterli olan lenf düğümü başına 1-2×10 6 hücreleri arasında verimlerifenotipik karakterizasyonu ve / veya fonksiyonel testler rform. Sıralı lenf nodu cerrahi veya lenfadenektomi başarıyla bize ve diğerleri 5-11 tarafından kullanılmıştır. Burada, brakiyal ve kasık lenf düğümleri bir Narkoz fare derisinde küçük bir kesi yaparak çıkarılabilir açıklar. Cerrahi yüzeysel ve hızlı bir olduğundan, fare çok çabuk kurtarır, iyi iyileştirir ve aşırı acı deneyim değil. Her iki günde, o zaman tabii deneyler için izin veren bir ya da iki lenf düğümleri hasat etmek mümkündür. Bu teknik, zamanla lenf düğümü özellikleri-bulunan lenfositler incelemek ve böylece de uygundur. Bu yaklaşım çeşitli deneysel tasarımlar için uygundur ve biz birçok laboratuvarda sıralı lenf nodu cerrahisine yarar olacağına inanıyorum.
Protocol
Discussion
Biz pek çok deneysel sistemler için geçerli olabilir LN cerrahi bir protokol tanımladılar. Immün yanıtlar veya bağışıklık hücre homeostazının takip etmek çok yararlı olmasına rağmen, bu tekniğin birkaç sınırlaması vardır. İlk olarak, yalnızca dört LN toplanabilirler. İkincisi, incelenen immün yanıt sistemik olabilir veya yüzeyel inguinal veya brakiyal (cilt-boşaltma) LN oluşması gerekir. Son olarak, hücreler hasat sayısı LN kaldırılması, mutlak hücre sayısı ihtiyaç duyulduğu…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Biz Sylvie Lesage ve protokol eleştirel okuma için tüm laboratuvar üye teşekkür ederiz. Bu çalışma Sağlık Araştırması (CIHR) olan Kanada Enstitüleri bir hibe (MOP-77.545) tarafından desteklenmiştir. Nathalie Labrecque bir FRSQ Kıdemli Bursu tarafından desteklenen ve Melissa Mathieu bir NSERC Alexander Graham Bell Kanada Yüksek Lisans Bursu alınır.
Materials
| Reagent Name | Company | Catalog number | Comments |
| Graefe Fine Pattern Premium Forceps | Harvard Apparatus | 52-2144 | Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip |
| Michel Clip Applying and Removing Forceps | Harvard Apparatus | 52-3779 | 12.5 cm (5 in) |
| Michel Clip 100 | Harvard Apparatus | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
| Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Schering-Plough | ||
| Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
| Rompun (Xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
| Isoflurane | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
| Hypotears eye ointment | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
| Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |
References
- Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
- Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
- Zhou, X. Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1. Immunity. 33, 229-240 (2010).
- Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes. J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).
- Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses. Immunity. 7, 123-134 (1997).
- Witherden, D. Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules. J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).
- Labrecque, N. How much TCR does a T cell need. Immunity. 15, 71-82 (2001).
- Leignadier, J., Labrecque, N. Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation. PLoS One. 5, e13740 (2010).
- Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).
- Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response. J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).
- Bassett, J. D. CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells. Blood. 117, 1146-1155 (2011).
- Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization. J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).
- Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation. Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).
