Murine 외면적인 림프절 외과
Summary
같은 마우스 내에서 시간에 따른 면역 반응의 진행을 수행하려면, 임파선이 순차적으로 수술로 제거할 수 있습니다. 여기서는이 기술을 수행할 수있는 방법에 대해 설명합니다.
Abstract
백신, 감염이나 종양에 대한 면역 반응의 진행을 이해하는 면역학 분야에서, 반응은 종종 시간이 지남에 따라합니다. 마찬가지로 림프구 항상성의 연구는 시간 과정 실험이 필요합니다. 같은 마우스 내에서 이러한 연구를 수행하는 것은 실험적 다양성뿐만 아니라 사용하는 마우스의 개수를 줄이기 위해 이상적입니다. 혈액 금단 시간 과정 실험의 성능을 가능하지만, 그것은 단지 lymphocytes 순환에 대한 정보를 제공하고 세포 1-4 제한된 수의를 제공합니다. 몸 전체 순환과 림프 노드에 거주하는 lymphocytes 서로 다른 성질을 가지고 있기 때문에 두 위치를 검토하는 것이 중요합니다. 수술에 의한 림프절의 연속적인 제거는 면역 반응이나 시간의 경과에 같은 마우스의 면역 세포 확장을 수행하는 독특한 기회를 제공합니다. 또한이 기술은 PE에 대한 충분한입니다 림프절 당 1-2×10 6 셀 사이에 듭니다phenotypic 특성화 및 / 또는 기능 assays를 rform. 순차 림프절 수술이나 lymphadenectomy이 성공적으로 우리와 다른 5-11에 의해 사용되었습니다. 여기서는 상완과 사타구니 임파선이 anesthetised 마우스의 피부에 작은 절개를함으로써 제거할 수 방법에 대해 설명합니다. 수술은 외면하고 신속하게 이루어지기 때문에, 마우스가 매우 빠르게 복구 잘 치유하고 과도한 통증을 경험하지 않습니다. 매초마다 하루 시간 과정 실험 허용 하나 또는 두 개의 림프절을 적출하는 것이 가능합니다. 이 기술은 시간이 지남에 임파선의 특성 노드 거주 lymphocytes를 공부하기 때문에 적합합니다. 이 방법은 여러 가지 실험 설계에 적합하며 우리는 많은 실험실은 순차 림프절의 수술을 혜택을 누릴 것이라고 믿습니다.
Protocol
Discussion
우리는 많은 실험적인 시스템에 적용할 수있는 에선 수술의 프로토콜을 설명했습니다. 면역 반응 또는 면역 세포 항상성를 수행하는 것이 매우 유용하지만,이 기법은 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 첫째, 적당히 LNs을 수확 할 수 있습니다. 둘째, 공부 면역 반응은 조직의 산물이거나 외면 사타구니 또는 상완 (피부 배수) LNs에서 발생합니다. 마지막으로, 수확 세포의 숫자 에선 제거, 절대 셀 참조…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 Sylvie의 Lesage 및 프로토콜의 중요한 독서에 대한 모든 실험실 구성원 감사드립니다. 이 작품은 건강 연구 (CIHR)의 캐나다 연구소에서 교부금 (걸레-77545)에 의해 지원되었다. 나탈리 Labrecque는 FRSQ 수석 장학금의 지원과 멜리사 매튜는 NSERC 알렉산더 그레이엄 벨 캐나다의 대학원 장학금을 받고있다.
Materials
| Reagent Name | Company | Catalog number | Comments |
| Graefe Fine Pattern Premium Forceps | Harvard Apparatus | 52-2144 | Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip |
| Michel Clip Applying and Removing Forceps | Harvard Apparatus | 52-3779 | 12.5 cm (5 in) |
| Michel Clip 100 | Harvard Apparatus | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
| Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Schering-Plough | ||
| Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
| Rompun (Xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
| Isoflurane | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
| Hypotears eye ointment | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
| Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |
References
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