Summary

צומת Murine שטחית לימפה ניתוח

Published: May 21, 2012
doi:

Summary

כדי לעקוב אחר ההתקדמות של תגובה חיסונית לאורך זמן בתוך העכבר זאת, בלוטות הלימפה ניתן להסיר ברצף על ידי ניתוח. כאן, אנו מתארים כיצד טכניקה זו ניתן לבצע.

Abstract

בתחום אימונולוגיה, להבין את התקדמות התגובה החיסונית נגד החיסון, זיהום או גידול, התגובה מלווה לעיתים קרובות לאורך זמן. באופן דומה, המחקר של הומאוסטזיס לימפוציטים דורש כמובן ניסויים זמן. ביצוע מחקרים אלו בתוך העכבר אותו הוא אידיאלי כדי להפחית את השתנות ניסיוני, כמו גם את מספר העכברים המשמשים. הנסיגה הדם מאפשרת ביצוע ניסויים כמובן זמן, אבל זה רק נותן מידע על מחזורי לימפוציטים ומספק מספר מוגבל של תאים 1-4. מאז לימפוציטים במחזור דרך הגוף המתגוררים בלוטות הלימפה יש מאפיינים שונים, חשוב לבחון את שני המקומות. הסרת רציפה של בלוטות הלימפה על ידי ניתוח מספק הזדמנות ייחודית לבצע תגובה חיסונית או הרחבת התא החיסונית של העכבר באותו הזמן. יתר על כן, שיטה זו מניבה בין 1-2×10 6 תאים בכל מפרק הלימפה אשר די PErform אפיון פנוטיפי ו / או מבחני תפקודית. לימפה הצומת רציף ניתוח או lymphadenectomy שימש בהצלחה על ידינו ואחרים 5-11. כאן, אנו מתארים כיצד בלוטות הלימפה הזרוע ואת מפשעתי ניתן להסיר על ידי ביצוע חתך קטן בעור של עכבר anesthetised. מאז הניתוח היא שטחית של דבר במהירות, עכבר מתאושש מהר מאוד, מחלים היטב ואינו לחוות כאב מוגזם. כל יום 2, ניתן לקצור אחת או שתיים בלוטות הלימפה המאפשר ניסויים כמובן זמן. טכניקה זו מתאימה ובכך ללמוד את המאפיינים של בלוטת לימפה לימפוציטים המתגוררים לאורך זמן. גישה זו מתאימה עיצובים ניסיוניים שונים ואנו מאמינים כי במעבדות רבות ירוויחו ביצוע ניתוחים עוקבים הצומת לימפה.

Protocol

1. הכנה לפני הניתוח העכברים טופלו בהתאם המועצה הקנדית על הנחיות טיפול בבעלי חיים. עכברים Anesthetise על ידי הזרקה של קטמין / xylazine (150/300 מ"ג / ק"ג, ה-IP) או על ידי שאיפה של isoflurane (2% חמצן…

Discussion

תיארנו פרוטוקול הניתוח LN אשר יכול לחול על מערכות ניסיוניות רבות. אמנם שימושי מאוד לעקוב אחר התגובות החיסוניות או הומאוסטזיס תא החיסון, טכניקה זו יש מספר מגבלות. ראשית, רק 4 LNs ניתן לקצור. שנית, התגובה החיסונית למד חייב להיות מערכתי או להתרחש שטחיות (עור, ניקוז) LNs מפשעתי …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

אנו מודים Lesage סילבי וכל חברי המעבדה של קריאה ביקורתית של פרוטוקול. עבודה זו נתמכה על ידי מענק (MOP-77545) מן המכון הקנדי לבריאות מחקר (CIHR). נטלי Labrecque נתמך על ידי מלגה בכיר FRSQ ומליסה מתייה קיבל אלכסנדר גרהם בל NSERC קנדה מלגות לתואר שני.

Materials

Reagent Name Company Catalog number Comments
Graefe Fine Pattern Premium Forceps Harvard Apparatus 52-2144 Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip
Michel Clip Applying and Removing Forceps Harvard Apparatus 52-3779 12.5 cm (5 in)
Michel Clip 100 Harvard Apparatus 52-3746 7.5-1.75 mm
Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) Schering-Plough    
Vetalar (Ketamine hydrochloride) Boniche Animal Healthcare   DIN: 01989529
Rompun (Xylazine) Bayer   DIN: 02169592
Isoflurane ABBOTT   DIN: 02032384
Hypotears eye ointment Novartis Ophtalmics   DIN: 02133288
Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) Omega L0000017 DIN: 02251477

References

  1. Zehn, D., Lee, S. Y., Bevan, M. J. Complete but curtailed T-cell response to very low-affinity antigen. Nature. 458, 211-214 (2009).
  2. Vezys, V. Memory CD8 T-cell compartment grows in size with immunological experience. Nature. 457, 196-199 (2009).
  3. Zhou, X. Differentiation and persistence of memory CD8(+) T cells depend on T cell factor 1. Immunity. 33, 229-240 (2010).
  4. Wirth, T. C., Badovinac, V. P., Zhao, L., Dailey, M. O., Harty, J. T. Differentiation of central memory CD8 T cells is independent of CD62L-mediated trafficking to lymph nodes. J. Immunol. 182, 6195-6206 (2009).
  5. Rooke, R., Waltzinger, C., Benoist, C., Mathis, D. Targeted complementation of MHC class II deficiency by intrathymic delivery of recombinant adenoviruses. Immunity. 7, 123-134 (1997).
  6. Witherden, D. Tetracycline-controllable selection of CD4(+) T cells: half-life and survival signals in the absence of major histocompatibility complex class II molecules. J. Exp. Med. 191, 355-364 (2000).
  7. Labrecque, N. How much TCR does a T cell need. Immunity. 15, 71-82 (2001).
  8. Leignadier, J., Labrecque, N. Epitope density influences CD8+ memory T cell differentiation. PLoS One. 5, e13740 (2010).
  9. Leignadier, J., Hardy, M. P., Cloutier, M., Rooney, J., Labrecque, N. Memory T-lymphocyte survival does not require T-cell receptor expression. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 105, 20440-20445 (2008).
  10. Obst, R., van Santen, H. M., Mathis, D., Benoist, C. Antigen persistence is required throughout the expansion phase of a CD4(+) T cell response. J. Exp. Med. 201, 1555-1565 (2005).
  11. Bassett, J. D. CD8+ T-cell expansion and maintenance after recombinant adenovirus immunization rely upon cooperation between hematopoietic and nonhematopoietic antigen-presenting cells. Blood. 117, 1146-1155 (2011).
  12. Lacombe, M. H., Hardy, M. P., Rooney, J., Labrecque, N. IL-7 receptor expression levels do not identify CD8+ memory T lymphocyte precursors following peptide immunization. J. Immunol. 175, 4400-4407 (2005).
  13. Leignadier, J., Rooney, J., Daudelin, J. F., Labrecque, N. Lowering TCR expression on naive CD8+ T cells does not affect memory T-cell differentiation. Immunol. Cell. Biol. 89, 322-325 (2011).

Play Video

Cite This Article
Mathieu, M., Labrecque, N. Murine Superficial Lymph Node Surgery. J. Vis. Exp. (63), e3444, doi:10.3791/3444 (2012).

View Video