Murine superficiale Lymph Chirurgia Node
Summary
Per seguire la progressione di una risposta immunitaria nel tempo all'interno del mouse stesso, linfonodi può essere sequenzialmente asportato chirurgicamente. Qui, si descrive come questa tecnica può essere eseguita.
Abstract
Nel campo della immunologia, per comprendere la progressione di una risposta immunitaria contro un vaccino, un'infezione o un tumore, la risposta viene spesso seguita nel tempo. Analogamente, lo studio dell'omeostasi linfocitaria esperimenti corso richiede tempo. Eseguire questi studi all'interno del mouse stesso è ideale per ridurre la variabilità sperimentale così come il numero di topi utilizzati. Il prelievo di sangue permette di effettuare esperimenti nel tempo, ma dà solo informazioni su linfociti circolanti e fornisce un numero limitato di celle 1-4. Dal linfociti circolanti attraverso il corpo e residente nei linfonodi hanno proprietà diverse, è importante esaminare entrambe le posizioni. La rimozione sequenziale dei linfonodi da un intervento chirurgico offre una opportunità unica di seguire una risposta immunitaria o l'espansione delle cellule immunitarie nel topo lo stesso nel tempo. Inoltre, questa tecnica si ottiene tra 1-2×10 6 cellule per linfonodo che è sufficiente a aerform caratterizzazione fenotipica e / o saggi funzionali. Sequential chirurgia linfonodo o linfoadenectomia è stato usato con successo da noi e altri 5-11. Qui, si descrive come i linfonodi inguinali brachiale e possono essere rimossi da una piccola incisione nella pelle di un mouse anestetizzati. Dal momento che l'intervento è superficiale e fatto rapidamente il mouse recupera molto velocemente, guarisce bene e non provare dolore eccessivo. Ogni secondo giorno, è possibile raccogliere uno o due linfonodi consentendo esperimenti andamento nel tempo. Questa tecnica è quindi adatto ad studiare le caratteristiche di linfonodi risiedono linfociti nel tempo. Questo approccio è adatto a vari disegni sperimentali e crediamo che molti laboratori trarrebbero beneficio da eseguire in sequenza operazioni linfonodali.
Protocol
Discussion
Abbiamo descritto un protocollo di chirurgia LN, che può essere applicato a molti sistemi sperimentali. Anche se molto utile per seguire le risposte immunitarie o omeostasi delle cellule immunitarie, questa tecnica ha alcune limitazioni. In primo luogo, solo quattro LNs può essere raccolto. In secondo luogo, la risposta immunitaria studiare deve essere sistemica o si verificano nelle superficiali inguinali o brachiale (pelle-drenante) LNS. Infine, il numero di cellule raccolte è influenzata dalla qualità della rimoz…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ringraziamo Lesage Sylvie e tutti i membri di laboratorio per la lettura critica del protocollo. Questo lavoro è stato sostenuto da una borsa (MOP-77545) dal Canadian Institutes of Health Research (CIHR). Nathalie Labrecque è supportato da una borsa di studio FRSQ Senior e Mélissa Mathieu ha ricevuto una NSERC Alexander Graham Bell Canada Graduate Scholarship.
Materials
| Reagent Name | Company | Catalog number | Comments |
| Graefe Fine Pattern Premium Forceps | Harvard Apparatus | 52-2144 | Strongly Curved, 10 cm (4 in), 0.8 mm tip |
| Michel Clip Applying and Removing Forceps | Harvard Apparatus | 52-3779 | 12.5 cm (5 in) |
| Michel Clip 100 | Harvard Apparatus | 52-3746 | 7.5-1.75 mm |
| Temgesic (Buprenorphine hydrochloride) | Schering-Plough | ||
| Vetalar (Ketamine hydrochloride) | Boniche Animal Healthcare | DIN: 01989529 | |
| Rompun (Xylazine) | Bayer | DIN: 02169592 | |
| Isoflurane | ABBOTT | DIN: 02032384 | |
| Hypotears eye ointment | Novartis Ophtalmics | DIN: 02133288 | |
| Baxedin (Clorhexidine gluconate 2% in isopropyl alcohol 70%) | Omega | L0000017 | DIN: 02251477 |
References
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