Этот протокол иллюстрирует уборки методика копчикового бычьего межпозвоночных дисков для органа культуры<em> В пробирке</em> Органной культуры.
Межпозвонкового диска (IVD) является стык соединения позвоночника позвонка к позвонку. Он функционирует передавать загрузку позвоночника и придаст гибкость позвоночника. Она слагается из трех отсеков: внутренний пульпозного ядра (НП), охватывающий от фиброзного кольца (AF) и два хрящевых концевые соединения Н. П. и А. Ф. в тело позвонка с обеих сторон. Дискогенная боль может быть вызвана дегенеративных заболеваний межпозвоночных дисков (DDD) и дисковые грыжи была определена в качестве одной из основных проблем в нашем современном обществе. Для изучения возможных механизмов IVD дегенерации, в пробирке органной культуры систем с живыми клетками диск очень привлекательным. В пробирке культуру нетронутым бычьего копчикового IVDs зашел настолько далеко, соответствующие модели системы, которая позволяет изучение механо-биологические аспекты в хорошо контролируемых физиологических и механических окружающей среды. Говядина IVDs хвост может быть получен сравнительно легко в большем количествеD очень похожи на человеческие поясничного IVDs по отношению к плотности клеток, клеточной популяции и размеров. Тем не менее, предыдущие бычьей хвостовой IVD методы добычи сохраняя хрящевые и костные концевые концевые удалось через 1-2 дней культуры с питанием пути были явно заблокированы сгустками крови. IVDs являются крупнейшими аваскулярный органов, таким образом, питательные вещества для клеток в НП исключительно зависит от диффузии через капиллярные почек от соседних тел позвонков. Наличие мусора костей и запекшейся крови на концевой пластинки поверхности могут мешать питательных диффузии в центр круга и жизнеспособность компромисс клетки. Наша группа, созданная относительно быстрый протокол для «крэк»-из IVDs из хвоста с низким риском заражения. Мы в состоянии permeabilize свежих вырезать костлявые поверхности концевой пластинки с помощью хирургической системы промывания струей, которая удаляет тромбов и резки мусора и очень эффективно вновь открывается путь питания диффузиик центру IVD. Наличие роста пластин по обе стороны от позвоночного кости, которых следует избегать, и должен быть удален до культуры. В этом видео мы опишем важнейшие шаги в процессе подготовки и демонстрации ключ к успешной органной культуры поддержания высокой жизнеспособности клеток в течение 14 дней в условиях свободного отек культуры. Культуры времени может быть продлен в случае необходимости механической среде может быть обеспечена с помощью механических биореактор нагрузки. Техника показала здесь может быть распространен и на другие виды животных, таких как свиньи, овцы и заячий хвостовой и поясничного IVD изоляции.
Первым шагом для успешного органной культуры, чтобы убедиться, что эксплантов не должна быть загрязнена. Хвост должен быть кожей, прежде чем начать с процедуры. Любое животное, волосы привести в стерильной лаборатории, может оказаться проблематичным с точки зрения загрязнения. Бычий х?…
The authors have nothing to disclose.
Этот проект был поддержан Швейцарским национальным научным фондом (ОЯТ # 310030-127586/1).
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
Fresh bovine intervertebral disc tissue from bovine tails, from local slaughter house (ideally within hours post-mortem and without skin). | |||
Pulsavac Plus AC System | Zimmer inc., Switzerland | 00-5150-486-01 | Best performance with the hip-spray head and with AC power supply (the one with the 8 AA battery pack does also work but is less convenient) |
High Capacity Fan Spray w/Splash Shield, 12.7cm length | Zimmer inc., Switzerland | 00-5150-175-00 | There are several spray heads available, we tested this one successfully |
Scalpel blades #22 and #10 | Swann-Morton, England | #10: 0201 #22: 0208 |
|
Scalpel blade holder # 3 and #4 | Hausmann, Germany | #3: 06.103.00 #4: 06.104.00 |
|
Lutz industrial blade | Lutz, Germany | 1022.0884 | |
Phosphate buffered Saline (PBS) | Invitrogen, Switzerland | 10010-023 | |
Dulbecco’s Modified Eagle Medium (DMEM) | Gibco, Switzerland | 11960-044 | |
Lactated Ringer’s solution (without glucose) | Bichsel, Switzerland | 133 0002 | |
6-well multi-well plate | TPP, Switzerland | 92006 | |
Betadine solution | Mundipharma, Switzerland | 10055025 | |
Surgical skin marker | Porex Surgical, Switzerland | 9560 | |
Large cutting board | Any brand is possible |